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SEM用試料のメタノール固定について トピック削除
No.8339-TOPIC - 2019/10/22 (火) 02:25:56 - marchan亭
植物の研究をしている大学院生です。

走査型電子顕微鏡(SEM)観察に用いる植物試料の固定法について、
アルコール固定は細胞が変形するので良くない、と言われていますが、無水メタノールを使うと変形が少ないという報告もあります[1, 2]。
ところが、実際にメタノール固定でSEM観察している論文をあまり見掛けません。植物の固定はパラホルムアルデヒドやグルタルアルデヒドを用いるのが一般的だと存じますが、メタノール固定はあまりいい方法では無いのでしょうか?

メタノールを使うと所要時間や作業工程を大幅に削減できるというので、もし実用に堪えるのであれば積極的に使っていきたいと思っています。
経験者やSEMに詳しい方がいらっしゃれば、ぜひとも知見をご教授いただきたく存じます。

何卒よろしくお願いいたします。


[1] Neinhuis, C., Edelmann, H. (1996). Methanol as a rapid fixative for the investigation of plant surfaces by SEM Journal of Microscopy 184(1), 14-16.
[2] Talbot, M., White, R. (2013). Methanol fixation of plant tissue for Scanning Electron Microscopy improves preservation of tissue morphology and dimensions. Plant methods 9(1), 36.
 
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(無題) 削除/引用
No.8339-3 - 2019/10/23 (水) 12:39:17 - marchan亭
toto様

返信ありがとうございます。
以前に4% FAA固定と簡単な比較したことはあったのですが、大きな違いはありませんでした。ただ、どちらの場合も細胞が潰れている箇所があったので、メタノール固定「でも」いい、固定法云々よりは臨界点乾燥がクリティカルポイントなのかな、という認識でした。
やはり一度、ちゃんとした比較は必要ですね・・・

(無題) 削除/引用
No.8339-2 - 2019/10/22 (火) 12:03:19 - toto
動物組織や細胞でメタノール固定だけでSEMすると、かなり形態が壊れます。それでSEMでは普通は使いませんが、植物の場合は表面が固いので大きくは壊れないようです。4000倍以下くらいで普通に表面をみるだけであればあまり問題はなさそうです。脱水が簡単になりますね。ただ、用いられる植物で一度、グルタル固定と比較した方が良いです。

SEM用試料のメタノール固定について 削除/引用
No.8339-1 - 2019/10/22 (火) 02:25:56 - marchan亭
植物の研究をしている大学院生です。

走査型電子顕微鏡(SEM)観察に用いる植物試料の固定法について、
アルコール固定は細胞が変形するので良くない、と言われていますが、無水メタノールを使うと変形が少ないという報告もあります[1, 2]。
ところが、実際にメタノール固定でSEM観察している論文をあまり見掛けません。植物の固定はパラホルムアルデヒドやグルタルアルデヒドを用いるのが一般的だと存じますが、メタノール固定はあまりいい方法では無いのでしょうか?

メタノールを使うと所要時間や作業工程を大幅に削減できるというので、もし実用に堪えるのであれば積極的に使っていきたいと思っています。
経験者やSEMに詳しい方がいらっしゃれば、ぜひとも知見をご教授いただきたく存じます。

何卒よろしくお願いいたします。


[1] Neinhuis, C., Edelmann, H. (1996). Methanol as a rapid fixative for the investigation of plant surfaces by SEM Journal of Microscopy 184(1), 14-16.
[2] Talbot, M., White, R. (2013). Methanol fixation of plant tissue for Scanning Electron Microscopy improves preservation of tissue morphology and dimensions. Plant methods 9(1), 36.

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