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(無題) 削除/引用 No.8321-7 - 2019/10/18 (金) 07:30:38 - mamma こりゃ失礼、説明ちゃんと見てませんでした・・・

(無題) 削除/引用 No.8321-6 - 2019/10/18 (金) 00:45:38 - ちき 一つのプラスミドに内部コントロール用と実験用の2つのルシフェラーゼ遺伝子が乗っているのはmiRNAの活性を測定するための製品だけのように見えますが。通常はコトランスフェクションだと思います。コトランスフェクションの場合の”共上がり/トランス効果”についてはプロメガのQ&Aに解説があります。 https://www.promega.co.jp/jp/jp_tech/FAQs/Q&A_Reporter_2.html

(無題) 削除/引用 No.8321-5 - 2019/10/17 (木) 10:26:09 - mamma 便乗で質問したいのですが、dual luciferase reporter assayとか言って、一つのプラスミド上に、特定の転写因子によって発現するプロモーター配列を上流に持つルシフェラーゼ遺伝子と、細胞の状態にあまり関係なく発現するプロモーター配列を上流に持つ別種のルシフェラーゼ両方が乗っている製品が有り、前者ルシフェラーゼ発現量を後者で補正するという事なのですが、 (https://www.promega.com/products/reporter-assays-and-transfection/reporter-assays/dual_luciferase-reporter-assay-system/?catNum=E1910#protocols) プロモーター配列が近くになくても機能するということからすると、後者ルシフェラーゼ発現も、それなりに前者プロモーターに影響されている可能性があるということなのでしょうか？ それとも、遠隔に有るプロモーターが影響するのはある限定的な条件下のみであり、上述製品では、前者プロモーターが後者ルシフェラーゼ発現に利かないようにデザインされているということなのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.8321-4 - 2019/10/16 (水) 19:37:43 - ちき 相分離等、最近の知見から考えれば不思議でもないですが、構造遺伝子とは別の染色体に乗っている調節領域もあったはず。

(無題) 削除/引用 No.8321-3 - 2019/10/16 (水) 18:52:55 - AP >その手の転写エンハンサーについては80年代くらいに精力的に研究されて、DNA上の距離は長くても（数百kbレベルで）作用し得る。プロモーターの上流、下流の転写領域内、転写領域よりももっと下流、いずれもあり得るということは確立されているよ。 あと、エンハンサー（やサプレッサー）は、作用するプロモーターにたいして方向性がない、配列がひっくり返っても作用する、ってことも原則。

(無題) 削除/引用 No.8321-2 - 2019/10/16 (水) 18:48:08 - AP >では、その遺伝子のエクソンやイントロン内に転写因子が結合している場合、その遺伝子の発現調節をしている場合もあるのでしょうか？ あるよ。 >また、転写開始点から5-10kbとかなり遠く離れた場所に結合しても転写制御してる可能性はあるのでしょうか？ あるよ。 数百kbでもありえる。 DNA上を直線的にたどれば遠いようでも、DNAは紐みたいなものだからね。ループをつくれば簡単にワープする。 その手の転写エンハンサーについては80年代くらいに精力的に研究されて、DNA上の距離は長くても（数百kbレベルで）作用し得る。プロモーターの上流、下流の転写領域内、転写領域よりももっと下流、いずれもあり得るということは確立されているよ。

転写因子のエクソン、イントロンへの結合 削除/引用 No.8321-1 - 2019/10/16 (水) 18:10:34 - 転写制御 いつもお世話になっております。 目的の遺伝子の転写調節について研究したいのですが、転写因子が目的遺伝子の転写開始点より上流に結合していると制御している可能性があると考えれるかと思います。 では、その遺伝子のエクソンやイントロン内に転写因子が結合している場合、その遺伝子の発現調節をしている場合もあるのでしょうか？ また、転写開始点から5-10kbとかなり遠く離れた場所に結合しても転写制御してる可能性はあるのでしょうか？

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