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pelBーHis-tagー目的タンパク質は何か問題ありますか? トピック削除
No.8311-TOPIC - 2019/10/10 (木) 16:04:36 - plants
この度、pelBシグナル配列をフュージョンさせた状態で目的タンパク質を発現させるためにシームレスクローニングでベクターを改造しようと思っています。

そこで、現在使っているN末端にHis-tagがつくようにしたものに、pelBシグナル配列をつけようとしたのですが、pelBシグナル配列があるベクターはタグがC末端についているものが非常に多く、N末端にHis-tagをつける際、どのくらいのリンカーを用意するかなどの参考にできなく、困っています。

pelB-His-tag-目的タンパク質のコンストラクションは何かいけないことがあるのでしょうか?
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.8311-5 - 2019/10/14 (月) 08:05:15 - plants
わざわざ調べていただきありがとうございました!
その配列を元に考えてみることにします。

(無題) 削除/引用
No.8311-4 - 2019/10/12 (土) 02:21:41 - おお
pETシリーズは調べた限り見つからんけど
https://connex.oxgene.com/Products/Plasmids/Details/Bacterial/pSF-OXB20-NH2-PelB-6His-TEV/OG3100
ここからGENBANK VECTOR SEQUENCE FILEが見れるからどういう間隔でタグをおいたらいいかなど考察できるでしょう。

ありがとうございます! 削除/引用
No.8311-3 - 2019/10/11 (金) 18:27:23 - plants
おおさん
お答えいただきありがとうございます。

見つけられなかったので、ありがたいです!参考にさせていただきます。
しかし、t7系で発現系を構築したいので、できればpet系があるとうれしいんですが、ご存知ですか?

(無題) 削除/引用
No.8311-2 - 2019/10/11 (金) 01:08:04 - おお
https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ogs3100?lang=en&region=US
これってどう?

pelBーHis-tagー目的タンパク質は何か問題ありますか? 削除/引用
No.8311-1 - 2019/10/10 (木) 16:04:36 - plants
この度、pelBシグナル配列をフュージョンさせた状態で目的タンパク質を発現させるためにシームレスクローニングでベクターを改造しようと思っています。

そこで、現在使っているN末端にHis-tagがつくようにしたものに、pelBシグナル配列をつけようとしたのですが、pelBシグナル配列があるベクターはタグがC末端についているものが非常に多く、N末端にHis-tagをつける際、どのくらいのリンカーを用意するかなどの参考にできなく、困っています。

pelB-His-tag-目的タンパク質のコンストラクションは何かいけないことがあるのでしょうか?

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