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SDSPAGEのマーカーがまっすぐ流れない
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No.8310-TOPIC - 2019/10/09 (水) 16:01:16 -
あいみょん
初歩的な質問を致します。
今まで普段通りにSDSPAGEできていたのですが、
分子量マーカーやサンプルなどが、SDSPABE分離ゲル状をまっすぐ流れなかったり、湾曲してしまったりしてしまう現象が起きて困っています。
SDSの酸性化などは大丈夫だと思いますが、ほかに考えられる原因はあるでしょうか?昔似たようなトピックが林立し拝見させていただきましたが、未だ明瞭な回答はなかったもので質問させていただきました。
細かいご指摘でもかまいません、宜しくお願いします。
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No.8310-4 - 2019/10/10 (木) 11:15:53 -
あいみょん
皆さんコメントありがとうございます。
おそらくですが、ウェルのコームを18ウェルの物から12ウェルのものに
変えてSDSPAGEしてみたら、改善されました。
やはり18ウェルでキツキツにやるとうまくいかないのかもしれません。
また、いくつかご指摘いただいた点も今後に生かしたいと思います。
ありがとうございました。
(無題)
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No.8310-3 - 2019/10/10 (木) 02:39:52 - おお
自作ならゲルが不均一。バッファーがゲルの両端に接触してない部分があった。電圧のかけ過ぎで熱が発生して特に熱のでかたが不均一なところで乱れた(特に端っこは乱れやすいらしい、マーカーを端にしていたら斜めにバンドが現れる)。
(無題)
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No.8310-2 - 2019/10/09 (水) 16:33:51 - cDNA
理想は全てのウェルに同じ成分をアプライしてある状況を作ることです。
サンプル、サンプルバッファーに含まれる成分が影響するので、アプライ量が多いほど影響が出やすいのではないでしょうか。
だからと言って、サンプルの濃度を上げることが簡単ではない場合も多く、サンプル調製時の制限で、塩や界面活性剤を含み、さらにウェルごとにそれが違ったりするので難しい訳です。
SDSPAGEのマーカーがまっすぐ流れない
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No.8310-1 - 2019/10/09 (水) 16:01:16 -
あいみょん
初歩的な質問を致します。
今まで普段通りにSDSPAGEできていたのですが、
分子量マーカーやサンプルなどが、SDSPABE分離ゲル状をまっすぐ流れなかったり、湾曲してしまったりしてしまう現象が起きて困っています。
SDSの酸性化などは大丈夫だと思いますが、ほかに考えられる原因はあるでしょうか?昔似たようなトピックが林立し拝見させていただきましたが、未だ明瞭な回答はなかったもので質問させていただきました。
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