Bio Technical フォーラム

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ウエスタンブロットのレーン数 トピック削除
No.8250-TOPIC - 2019/09/15 (日) 09:57:27 - T.S
明後日ウエスタンブロット を行うのですが、先輩にコームのレーン数を8で行なった方が良いと指摘されました。
レーン数が少なくなると基本的にレーンの幅が広くなる?と思うのですが、サンプル数以外の理由でレーン数を調節することはあるのでしょうか。
ご検討のほどよろしくお願い致します。
 
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No.8250-8 - 2019/09/17 (火) 10:02:32 - 独り言
レーン数が多すぎるとバンドが汚くなってしまう。とくに狭いウェルだとバンドが丸くなってしまう。

ミニゲルの場合は12-14レーン程度の以下の幅が、論文に載せるために必要なクオリティーには必要かかな。
サンプルが少ないのであれば、レーンが少なく、幅が広めのウェルを使用するのがベスト。

とにかく発現しているだけを確認するとか、ゲルトかのフラクションが大量にあるとかだと、狭いレーンもしよう

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No.8250-7 - 2019/09/16 (月) 23:44:51 - おお
幅の広いプレートで流せるようなSystemも何社かあるよ。以下はその一部。多分他にもあると思う。物によっては48サンプル一気に流せるらしい。

http://www.scie-plas.com/documents/SCIE-PLAS/distributors/232.pdf
https://www.atto.co.jp/eng/products/page/Wide-Gel-8x14-cm/WSE-1170

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No.8250-6 - 2019/09/16 (月) 16:58:02 - ちき
大海先生の強烈なのがあったはずと思って探したら、まだありました。ミニゲルで30レーン(!)。

http://www.ims.u-tokyo.ac.jp/ohmiken/Labメモ/memo%202.html

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No.8250-5 - 2019/09/16 (月) 16:19:15 - ho
比べたいのもが多いときにレーンが足りないといろいろ工夫しないといけないので、れーんはあるていどの数はあったほうがいい。でないと僅か数サンプルのためにゲル2枚つくって、一度に膜1枚に2枚のげるを載せて転写とか少々面倒なことしないといけなくて、それで実験していてレーンがすくなくてありがたいという局面はあまり出会わない。15レーンが標準とおもうけど、ゲル2枚つくるのがうっとうしいくてミニゲルで18レーンのコームを特注で作ったという話はきいたことある。20レーンは無理といわれたらしい。

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No.8250-4 - 2019/09/16 (月) 01:36:06 - おお
印象だけで言いますと、コームの幅が広いとバンドもシャープになったりして検出力もいいような感じがします、同じ量のせるならなおさら。

おそらく泳動を乱す共雑物も横に広がって影響力が弱くなるからかなと勝手に想像してます。

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No.8250-3 - 2019/09/15 (日) 11:13:19 - AP
サンプルのアプライ量との兼ね合いですかね。
広いウェルでちょうどいい量を狭いウェルで流したらバンドが太くなったりスメア気味なったりしてキレが悪くなりがち。

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No.8250-2 - 2019/09/15 (日) 11:08:11 - 遠さく爆推し
私は幅の狭いコームを好んでミニゲルを流しています。
具体的には15レーン。
もちろんたくさんのサンプルボリュームを流さないといけない場合には(40ul以上)、8なども使いますが、そうでなければ15レーンが基本です。

期待しているのはより感度よくモノが検出されるのではないかと考えています。
8レーンよりは濃縮されそうですし。みなさんのご意見を聞けるといいですね。

ウエスタンブロットのレーン数 削除/引用
No.8250-1 - 2019/09/15 (日) 09:57:27 - T.S
明後日ウエスタンブロット を行うのですが、先輩にコームのレーン数を8で行なった方が良いと指摘されました。
レーン数が少なくなると基本的にレーンの幅が広くなる?と思うのですが、サンプル数以外の理由でレーン数を調節することはあるのでしょうか。
ご検討のほどよろしくお願い致します。

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