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(無題) 削除/引用 No.8127-9 - 2019/08/03 (土) 02:39:51 - おお アクチンとかだと出ちゃうかもね。 よくわからないから、えいやーでやるのはこういう場合良くないですね。 ＞ストリッピングの方法は知らず、調べながら進めなければならなかったため 調べるのに１日費やすわけでもないだろうし。。。ググればすぐ答え返してくれる時代だし。WBやってるラボだったらだれかプロトコールやすでにStripping Bufferも作って持っている人がいるんじゃないかとも。

(無題) 削除/引用 No.8127-8 - 2019/08/03 (土) 01:45:22 - asan 数秒だろうが、ダメなもんはダメです。 3秒ルールですか？ 自分の経験で言うと、FLAGなどの過剰発現なんかだとwash液を間違って混ぜちゃったくらいでも出たこともあります。 ま、ぶっちゃけ、出ないだろうってやるのがどうか、現実的に出ないのか、例えば2次抗体を間違えて後から別のでストリップせずに見てOKか？など、別に正解不正解はないですけどね。 ただ、単にストリップしてブロッキングからやり直しが面倒だからとか、流し直すのが面倒だからとか言う話で横着を認めてくれと言うスタンスは、多くの場合、研究者には嫌われる考え方だと思います。

(無題) 削除/引用 No.8127-7 - 2019/08/02 (金) 21:48:40 - はじしれ こういう質問するやつって、 ここで大丈夫って言われたら、 そのデータを堂々とあちこちで使うのか

(無題) 削除/引用 No.8127-6 - 2019/08/02 (金) 08:22:01 - TS 数秒なら大丈夫なことが多いでしょう。 分子量が離れていて、クリーンなバンドが得られるような抗体なら まったく気にしなくても大丈夫。 ストリッピングなしでRe-probeする方法があるわけですし。

(無題) 削除/引用 No.8127-5 - 2019/08/01 (木) 23:12:06 - S 生憎ストリッピングの方法は知らず、調べながら進めなければならなかったため、あまり気が進まなかった次第です。 一先ずこのまま進めて、問題があれば人がいる時に確認をとりながら抗体を剥がして一次抗体から再度進めるか、泳動からやり直したいと思います。 皆さんありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.8127-4 - 2019/08/01 (木) 22:03:36 - み 検出される蛋白の分子量が違えばそのまま進めても問題にならないかもしれない。 stripする方法を知っているなら軽くやって抗体あて直しても大した手間じゃないだろうに。

(無題) 削除/引用 No.8127-3 - 2019/08/01 (木) 21:35:35 - す ストリッピング溶液で抗体はがしてやり直し

(無題) 削除/引用 No.8127-2 - 2019/08/01 (木) 20:59:40 - *** そのまま続けるけど、目的と違う一次抗体に浸けてTBS-Tで洗った後に、本来の一次抗体に浸けて発色させたらどうなるかという目的のための実験。 本来の目的のためにもう一回やる。

WBでの一次抗体間違えの対処 削除/引用 No.8127-1 - 2019/08/01 (木) 20:13:49 - S ウェスタンブロットの操作中に、メンブレンを目的と異なる一次抗体に浸けてしまいました。すぐに気が付き数秒で取り出してTBSTで洗浄したのですが、このまま本来の一次抗体に浸けてしまっても大丈夫でしょうか。それとも一度抗体を剥離させた方が良いのでしょうか。 教えて頂けると幸いです。

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