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ヒト細胞へのレトロウイルス作成 トピック削除
No.8117-TOPIC - 2019/07/29 (月) 16:30:59 - mute
現在、ヒト細胞へのレトロウイルス作成を行っています。

Plat-Eでは、感染効率はほぼ100%なのですが、Plat-Aではほぼ0%に近い状態です。

他の研究室の人に聞いてみると、Plat-Aはかなり効率が悪いことで有名で、100倍程度濃縮して使って何とか感染させている人もいました。

文献上では、Retro-X Universal Packaging Systemを用いて、パントロピックなレトロウイルスを用いてうまくいっている記載も見受けられます。

ヒト細胞へのレトロウイルス感染経験のある方がおられましたら、アドバイスよろしくお願い致します。
　
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No.8117-8 - 2019/07/30 (火) 13:31:53 - mute
皆様ありがとうございます。

既に買ってしまいました・・・。
明日には届くそうなので、時間を金で買ったと思う事にします。

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No.8117-7 - 2019/07/30 (火) 10:50:31 - M
邪道ですが、Plat-EにVSVGとtransfer vectorをco-transfectして得たウイルスで、ヒト細胞に感染するか見てみるのはどうでしょう？　Plat-Eで試した事はないですが、Phenix-Eでやったことがあります（ヒト細胞にも入りました）。VSVG（pantropic）にすれば解決する問題かどうか、チェックできそうな気がします。

あと、どうでもいい事ですけど、このキット、かなり高価ですね。かなりボロい商売のような、、、、
mpさんがおっしゃるように、293Tにtri-transfectionすればいいだけなので、自分だったら買う気がしないです、、、

(無題) 削除/引用
No.8117-6 - 2019/07/30 (火) 10:02:27 - mp
わざわざ高いkitを購入しなくても、gag-polだったらPLAT-E開発者の先生から頼めばすぐもらえますし、VSV-G発現プラスミド（pMDG)もaddgeneから安く入手できます。まあお金に余裕があるのであればその限りではありませんが。

(無題) 削除/引用
No.8117-5 - 2019/07/30 (火) 09:47:32 - おお
>アンフォトロピックより、パントロピック

違いがあるのか？

(無題) 削除/引用
No.8117-4 - 2019/07/30 (火) 09:30:50 - mute
すみません。PLAT-Eはマウス細胞への感染効率です。手技に問題はなさそうという意味でした。

既に、レトロウイルスベクターを構築し、マウス細胞へのレトロウイルス感染で発現も確認していますので、出来ればレトロウイルスのまま行きたいと考えています。
レンチウイルスの系も購入するとかなり高額なようですし。

やはり、アンフォトロピックより、パントロピックなウイルスの方が良さそうですね。Retro-X Universal Packaging Systemを購入して進めたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.8117-3 - 2019/07/30 (火) 06:10:14 - おお
Plat-EはEcotropicでマウスの細胞に感染するが人には感染しづらいと思いますが、、、AとE逆になってる？

(無題) 削除/引用
No.8117-2 - 2019/07/29 (月) 20:04:10 - mp
gag-polとvsv-gを一過性発現させてパッケージングし、ヒト細胞のレトロ感染を行なっています。ただレンチの方が感染効率含め何かと便利なので、レトロにこだわる理由がないのであれば、レンチをお薦めします。

ヒト細胞へのレトロウイルス作成 削除/引用
No.8117-1 - 2019/07/29 (月) 16:30:59 - mute
現在、ヒト細胞へのレトロウイルス作成を行っています。

Plat-Eでは、感染効率はほぼ100%なのですが、Plat-Aではほぼ0%に近い状態です。

他の研究室の人に聞いてみると、Plat-Aはかなり効率が悪いことで有名で、100倍程度濃縮して使って何とか感染させている人もいました。

文献上では、Retro-X Universal Packaging Systemを用いて、パントロピックなレトロウイルスを用いてうまくいっている記載も見受けられます。

ヒト細胞へのレトロウイルス感染経験のある方がおられましたら、アドバイスよろしくお願い致します。
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