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Plat-Eのtransfection時にPuromycin/Blasticidinはtoxic？ トピック削除
No.8107-TOPIC - 2019/07/25 (木) 12:39:47 - D1
Plat-Eの液体培地にはPuromycin/Blasticidinが入っていますが，transfectionのマニュアルを見ると，その2剤を含め，あらゆる抗菌薬を除いた培地を用いよ，と書いてあります．耐性遺伝子があっても，transfection時には細胞が弱り，ダメージを受けるのでしょうか？
　
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皆さんありがとうございます！ 解決済み 削除/引用
No.8107-8 - 2019/07/27 (土) 12:22:47 - D1
皆さん，沢山のご意見をありがとうございます．大変勉強になりました！
独り言さんが仰る通り，レトロウイルス作成の際のtransfectionでした．
やはり，感染細胞はPuro/Blastで死ぬのですね．
ただ，Plat-Eがtransfection後に死ぬことがあったので，それも本来耐性のはずのPuro/Blastのせいなのかなと思って質問させて頂いたところでした．

(無題) 削除/引用
No.8107-7 - 2019/07/26 (金) 10:17:03 - 独り言
それってレトロウイルスを作るときのトランスフェクションですか？
もしそうであれば、puromycin blastを入れておくと、ウイルスにpuro, blastが混ざって、感染させるときに、感染細胞がpuro,blastで死んでしまうので入れたら駄目です。

(無題) 削除/引用
No.8107-6 - 2019/07/26 (金) 09:43:22 - mp
PLAT-E扱ったことがありますが、puroとbsは抜いてtransfectionしてました。P/Sは入れていても問題なかったというか、開発者のプロトコールではそうなっています。

(無題) 削除/引用
No.8107-5 - 2019/07/26 (金) 09:16:22 - おお
>Penicillin/Streptomycinは入れといたほうがいいと思いますよ。

昔のプロトコールはPenicillin/Streptomycin FreeでTransfectionするようになってたはず。

(無題) 削除/引用
No.8107-4 - 2019/07/25 (木) 18:51:41 - ***
いやPenicillin/Streptomycinは入れといたほうがいいと思いますよ。
何かしら入れとかないとすぐコンタミする。私が下手なだけかもですけど。
個人的にPLAT-Eに10％FCS, 1×P/S(nakarai)でトランスフェクションして細胞が死ぬってないので、原因は他にありそうですけど。DNAとかトランスフェクション試薬とか。

ありがとうございます 解決済み 削除/引用
No.8107-3 - 2019/07/25 (木) 17:24:59 - D1
よく分かりました．transfectionした際に細胞が死ぬことがあり，原因を考えた結果，それら抗菌薬が一因かなと思いました．Penicillin/Streptomycinが入ったC-DMEMもやめたほうが良いかも知れませんね．
有り難うございました．

(無題) 削除/引用
No.8107-2 - 2019/07/25 (木) 12:48:38 - Ats
Puromycin/Blasticidinともにタンパク質合成阻害剤なので、少しでもその影響を少なくしてウィルス産生量の向上を目指すためだと思います。
またリポフェクション試薬に上記抗生剤が取り込まれ、遺伝子導入効率が落ちたり細胞内薬剤濃度が上がり予期せぬ影響が出る可能性もあるからだと思います。

Plat-Eのtransfection時にPuromycin/Blasticidinはtoxic？ 削除/引用
No.8107-1 - 2019/07/25 (木) 12:39:47 - D1
Plat-Eの液体培地にはPuromycin/Blasticidinが入っていますが，transfectionのマニュアルを見ると，その2剤を含め，あらゆる抗菌薬を除いた培地を用いよ，と書いてあります．耐性遺伝子があっても，transfection時には細胞が弱り，ダメージを受けるのでしょうか？
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