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(無題) 削除/引用 No.8099-3 - 2019/07/23 (火) 12:26:39 - み phospho-p65とか言っているけど、total p65抗体での検出すらしていないのかい？ ならば蛋白調製が悪いのか、刺激が不適切なのか、抗体が悪いのか、腕が悪いのか全く分からない。

(無題) 削除/引用 No.8099-2 - 2019/07/23 (火) 12:23:15 - み >[Re:1] 困った人２さんは書きました : > RIPA+プロテアーゼ阻害剤を加えて、４度からの一晩−２０度保存で、翌朝遠心して上清を取っています。 Buffer加えた後どのように細胞破砕しているのか不明。なので核蛋白が抽出されていない可能性があるのか？とか言われても「あるかもしれない」としか言いようがない。 心配なら遠心後のペレットをSDS-BufferでBoilしたものも流すとか、細胞を直接SDS-Bufferで抽出するとか試せば良い。 他の核蛋白に対する抗体があるならそれらの検出には問題がないことくらいは確認すべきだろう。 リン酸化抗体なら刺激方法の問題も否定できない。 最悪、抗体の良し悪しも気にしないといけない。

ｐｐ６５のWB 削除/引用 No.8099-1 - 2019/07/23 (火) 10:56:54 - 困った人２ 細胞株の刺激系でｐｐ６５を検出したいのですが、サンプルの調整方法が悪いのか、うまく見えません。核内のタンパクが取れていないのかもしれません。 RIPA+プロテアーゼ阻害剤を加えて、４度からの一晩−２０度保存で、翌朝遠心して上清を取っています。このやり方だと、核が壊れない可能性があるらしいのですが、本当ですか？本来、どうすべきなのでしょうか。ご教授願います。

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