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−80°Cでの細胞株の保存について トピック削除
No.8095-TOPIC - 2019/07/22 (月) 17:47:48 - task
細胞培養の初心者です。
当方、10％DMSOの培地で細胞を液体窒素中で保存しています。

−80°Cでの保存を試された方はいらっしゃいますか。そのときの条件と、どの程度の期間保存できたかを教えていただきたいです。

また、液体窒素、−80°C問わず、DMSOやセルバンカー以外のよい保存方法をご存じの方がいらっしゃいましたら、ご意見をいただければ幸いです。

よろしくお願いいたします。
　
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No.8095-8 - 2019/07/24 (水) 12:20:48 - task
bhjk様>>
ご回答いただきありがとうございます。半年に一回となると、数が多いと大変そうですね。安定した液体窒素での保管ができれば苦労しないのですが…

PYK様>>
2、3年は起きるというのは朗報です。bhjkさんの仰るように品質を保つにはある程度再培養も必要とは思いますが、手が回らなくても2年は大丈夫と思えばまだ助かります。ご回答ありがとうございました。

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No.8095-7 - 2019/07/23 (火) 23:03:55 - PYK
「セルバンカー」やナカライの「セルリザーバーワン」を試したことありますが、汎用細胞株のHEK293TやHeLa、COSはもちろんのこと、MEF(Primary含む)やNeuro2a、HepG2なども2-3年は問題なく起きていました。
参考になれば幸いです。

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No.8095-6 - 2019/07/23 (火) 22:28:54 - bhjk
かなり昔の話ですがそのラボでは古典的な血清＋DMSO 溶液で−８０℃保存していました。かなりいろいろな細胞がありましたが1年以内くらいなら問題なく使っていました。でも、数年に渡るような長期保存だとやはり液体窒素には劣るようです。なので半年に１回くらい起こして再培養して再凍結してました。

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No.8095-5 - 2019/07/23 (火) 08:23:50 - task
んん様＞
こちらにもいろいろ事情があります。ご回答ありがとうございました。

mon様＞
メチルセルロースの添加がポイントですね。詳細な準備の仕方までご指導いただき、ありがとうございます。

おお様＞
せめて奥の方で保管するくらいが対策でしょうか…。ご回答ありがとうございます。

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No.8095-4 - 2019/07/23 (火) 00:24:52 - おお
10% DMSO in 血清でやってます。ー８０でもそれで保存しています。きっちりとー８０度をキープしていれば、昔から使われている増殖が安定している細胞では数年以上持つと思いますが、開け締め、場合によっては故障のためTransferしたりとなかなか良い条件にしておくのが難しいのが欠点だと思います。

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No.8095-3 - 2019/07/22 (月) 20:22:01 - mon
自作するなら、0.1% メチルセルロース+5−10% DMSO+培地（無血清でもOKですが、血清10-20%含有の方が優れている)が、-80℃での保存に向いています（紙箱等にいれて直接-80℃に入れてもOK)。
メチルセルロース溶液はフィルター滅菌出来ないので、粉末（＋スターラー）でオートクレーブ滅菌して、滅菌済み培地を加え一晩ほど撹拌して溶かします。
DMSOの品質（特級でもダメ）に注意すること、エンドトキシン等の混入に注意して作製容器（の清潔度）や水に気を遣う必要があります。

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No.8095-2 - 2019/07/22 (月) 19:37:07 - んん
すいません。質問の意図が分からないのですが、なぜ初心者の方が世の中のスタンダードである保存法以外を模索されるのでしょうか。

また、研究室の標準プロトコールはないのでしょうか、

一般的に、DMSO血清法、セルバンカー、バンバンカー法で−80度は数年、液体窒素それ以上 です

−80°Cでの細胞株の保存について 削除/引用
No.8095-1 - 2019/07/22 (月) 17:47:48 - task
細胞培養の初心者です。
当方、10％DMSOの培地で細胞を液体窒素中で保存しています。

−80°Cでの保存を試された方はいらっしゃいますか。そのときの条件と、どの程度の期間保存できたかを教えていただきたいです。

また、液体窒素、−80°C問わず、DMSOやセルバンカー以外のよい保存方法をご存じの方がいらっしゃいましたら、ご意見をいただければ幸いです。

よろしくお願いいたします。
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