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質問とは異なりますが 削除/引用 No.8069-3 - 2019/07/18 (木) 21:31:57 - ema 主に赤血球の破壊ですが、通常のリンパ球もある程度破壊されます。 それらの細胞のごみ（DNAを含む）がよれたようなゴミとして出てきます。 Ack後にもメッシュでフィルターをかけています。 細かい手順ですが、リンパ球へのダメージを少なくするために ＞1mlのACKバッファーという赤血球溶血バッファーを加え、 少しおいて、Ackの5倍以上量の培地で希釈してから遠心をしています。 そしてフィルターをかけてから、染色工程をすすめています。 また、フィルターでは固まりになった組織・ゴミはとれますが、分散している結合組織、脂肪組織は分離できません。

(無題) 削除/引用 No.8069-2 - 2019/07/10 (水) 13:27:38 - bluehornet 私も末梢血から有核細胞成分を分離する際にACKバッファーを使っています。 溶血・遠心後に有核細胞成分ペレットの上に半透明で赤色がかった層を認めますが、これがいわゆる赤血球ゴースト（のハズ）です。 私の場合この成分は必要ないので、ピペッティングで赤色半透明の層をなるべく除くようにしています。

脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について 削除/引用 No.8069-1 - 2019/07/10 (水) 11:28:38 - 脾臓 脾臓のフローサイトでの赤血球溶血操作時の疑問について質問させてください。 マウス脾臓を取り出し、先を90度に折った21Gの針で脾臓細胞を脾臓から丁寧に取り出しています。この時のバッファーはPBSにBSAとEDTAを加えたものです。 だいたいほぐれたら70ミクロンのフィルターで細胞を濾し被膜や結合組織、脂肪組織を除いた後、200Gで遠心し、デカント後に1mlのACKバッファーという赤血球溶血バッファーを加え、すぐに遠心し、上清をデカントし、そこにFACSバッファーを加えて染色をはじめています。 ここで質問があるのですが、FACSバッファーで最後に懸濁した際にも被膜のような不溶性の浮遊物が生じます。この浮遊物はACKバッファー処理することで発生しているようです。これはなんでしょうか？ ACKバッファー処理で赤血球が壊れ、その赤血球膜なんかが凝縮しているのでしょうか？これはみなさんでも生じていますでしょうか？ 教えてください、よろしくお願いします。

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