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(無題) 削除/引用 No.8066-3 - 2019/07/10 (水) 08:44:02 - 雀 原因についてはおおさんのご説明どおりだと思いますし、もしそうであれば最初のシグナルは飽和しているので定量性についてはあてにならなくなっています。 また、つまらないことですがリプロービングという言葉の使い方がおかしいです。一度目の抗体を剥がすのはストリッピング。

(無題) 削除/引用 No.8066-2 - 2019/07/09 (火) 14:02:00 - おお 最初の検出でシグナルが非常に強い場合、その部分のタンパクの検出力が次のプロービングでシグナルが出ない事があります。 想像ですが化学発光で出来る副産物やラジカルとかがその部分のタンパクに反応したりしているのかなとおもっています。 そういう場合は弱いシグナルが出るほうから先にやる。または強いシグナルがでるばあい、抗体濃度などを調製してシグナル強度をおさえるとうまくいきます。 初期のECL（ECL Plus よりも弱い）ものではそこまで反応性が減らないという感覚がありますが、ECL Plusやそれ以降の強いものではよく起こっているように思えます。 シグナルが検出された部分が黄色くなっているようでしたらこの可能性がたかいとおもいます。

WBについて 削除/引用 No.8066-1 - 2019/07/09 (火) 12:04:05 - あおはる お世話になっております。 WBについてご質問させていただきます。 p-△△をまず測定し、リプロービング後に内在性△△を測定しています。 抗体を使用できるか確認した際、リプロービングせずにメンブレンを二分割し、p-△△、△△を使用したところ問題なくバンドが確認できました。 しかし、p-△△をリプロービングしたのち△△を確認したところ△△に位置するバンドだけ消失してしまいました。 このような現象があった方はどのようにしてこの問題をクリアしたか教えていただけると幸いです。 ちなみに、他のp-○○→〇〇も同時に測定していますが、そちらはリプロービング後も確認できるため、リプロービングバッファーに問題はなさそうです（ないと思いたい笑）。

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