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培地と細胞 トピック削除
No.8018-TOPIC - 2019/06/23 (日) 14:59:23 - mm
初めまして

2種類の細胞を共培養して、機能性の変化を見ようとしています。
その際使用する培地は、2種類の細胞の培地を混合したものを使用しています。
共培養による細胞間の相互作用を見たいのですが、培地のせいで機能性が変化していました。機能とはタンパク発現量です。

培地が違うとタンパク発現量が増減する理由としては、栄養や血清量が、これまで継代してきた環境と異なり、ストレスになっているからと考察しました。

生体内では同じ体液のはずなのに、細胞培養となると細胞種ごとに最適な培地があるのは、その細胞に必要な栄養の最低限のみで構成されているからでしょうか。

質問というよりは諸先輩方のご意見をうかがえたら幸いです。宜しくお願い致します。
 
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No.8018-6 - 2019/07/01 (月) 11:13:29 - mm
melon様

説明不足で申し訳ありません、この実験の共培養は、膜で隔ててあるので両細胞が入り混じるような系ではありません。

液性因子のみの相互作用から検討し、将来的には細胞同士の接着による影響を見たいと考えています。

(無題) 削除/引用
No.8018-5 - 2019/06/25 (火) 03:57:38 - おお
まず共通の培地を選択して両者をadaptationしてから混合培養するのも手かもしれません。

培地についてはEMEMという最少培地がありますが、組織から株化する際により株化がうまくいくように栄養のRichなものを使うことがあります。

また対象の組織、細胞種によって維持に最適な培地が開発されていて、カルシウムが高いと分化するとか、増殖がホルモン依存性だとかいろいろ細胞によって必要な条件があります。

一度扱っている細胞の種類がなぜその培地を使っているのかまずはそこを見極めるほうが良いでしょう。

(無題) 削除/引用
No.8018-4 - 2019/06/23 (日) 17:59:53 - mom
培地の組成を見て、より栄養分(組成・血清量も考慮)が豊富な方に合わせれば良いと思いますが、いかがでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.8018-3 - 2019/06/23 (日) 16:34:48 - おお
>その細胞に必要な栄養の最低限のみで構成されているからでしょうか。

No

(無題) 削除/引用
No.8018-2 - 2019/06/23 (日) 15:37:28 - melon
例えば、同じ培地で培養できるように順化はできないのでしょうか。
サイトカイン依存性などの問題があるとか・・・?

ところで、回答とそれて申し訳ありません。

2種類の細胞を混ぜて、共培養におけるタンパク発現の解析を行うとのことですが、細胞の回収はどのように行うのでしょうか。

セルソーターで二つの細胞を分別して採取するのでしょうか。

「液性因子のみの相互作用」を研究したいのか、「直接接着共培養」の影響を研究したいのか、などちょっと気になりました。申し訳ありません。

培地と細胞 削除/引用
No.8018-1 - 2019/06/23 (日) 14:59:23 - mm
初めまして

2種類の細胞を共培養して、機能性の変化を見ようとしています。
その際使用する培地は、2種類の細胞の培地を混合したものを使用しています。
共培養による細胞間の相互作用を見たいのですが、培地のせいで機能性が変化していました。機能とはタンパク発現量です。

培地が違うとタンパク発現量が増減する理由としては、栄養や血清量が、これまで継代してきた環境と異なり、ストレスになっているからと考察しました。

生体内では同じ体液のはずなのに、細胞培養となると細胞種ごとに最適な培地があるのは、その細胞に必要な栄養の最低限のみで構成されているからでしょうか。

質問というよりは諸先輩方のご意見をうかがえたら幸いです。宜しくお願い致します。

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