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(無題) 削除/引用 No.8008-10 - 2019/07/07 (日) 13:27:48 - AP すでに気をつけているところかと思いますが 、 PVDF膜をいきなりMeOHのドボ浸けすると、膜の内層に含まれる空気が表面の濡れた層に阻まれて外部に抜けられず、空気が残っているところにはMeOHも浸透できず、その後、時間を長く置いても芯までウェットできなくなります。 少なくとも、はじめのしばらくの間は膜をMeOHの表面に浮かせるようにして置いておくか、MeOHで湿らせたろ紙の上に置いておくとかすると失敗が少ないと思います。

(無題) 削除/引用 No.8008-9 - 2019/07/07 (日) 07:19:32 - おお いろいろな情報から、膜のアクチベーションが悪いのかそれともトランスファー中に泡が発生している可能性を考えました。 メタノールによるアクチベーションのさい、使う容器は洗浄されたものを使いますがどうも汚れてたらどうしようと不安なので直前に洗浄し直して使ってます。今までは多少水滴がついた状態でも構わずメタノールを加え使ってましたが、もしかしたらとおもいちゃんと水滴を拭いてからメタノールを加えるようにしました。 またメタノールは色が半透明になればすぐバッファーに置換できることになっているようですが、メターノールで１０分以浸して（振盪しながら）、バッファーに置換して１０分以上振盪することにしました。 トランスファーのときには膜をセットしてタンクにバッファーと氷をつけるやつを入れてから、スターラーでタンク全体の温度が均一化するように数分待ってからトランスファーをスタートしました。 何処が改善に寄与したかはわかりませんが、今の所それでトラブルがなくトランスファーできているようです。ちょっと手抜きになってきている部分もあったかもしれませんね。 皆さんコメントありがとうございました。 ＞メタノールが少しばかり入ってます。やはり危険物として回収してますか。すぐに結構な量になってしまうのですが。 たしかに。こちらは頼めば頻繁に回収してくれるので困ることはないです。

(無題) 削除/引用 No.8008-8 - 2019/06/22 (土) 22:39:18 - fg 空気は入って失敗することはあるけど、こんなふうな感じとは明らかに違うな。装置の問題かな？部分的に高温になって気泡が生じて乾燥したような雰囲気なんだが、可能性の範囲は越えないけど。 全然関係ないですが、トランスファーバッファーは事実上グリシンとトリスのありきたりの緩衝液ですが、メタノールが少しばかり入ってます。やはり危険物として回収してますか。すぐに結構な量になってしまうのですが。

(無題) 削除/引用 No.8008-7 - 2019/06/21 (金) 11:38:00 - おお >PVDFをMeOH処理したあとtransfer bufferに戻すと思うけどその処理が一様にできていない。ムラがあるとか。 このあたりいろいろ気をつけながらやろうとしてますが、、、前回のはトランスファーバッファーに移して２０分位放置してたんです。でもその４まいのうち２枚が、、、

(無題) 削除/引用 No.8008-6 - 2019/06/21 (金) 09:52:41 - み PVDFをMeOH処理したあとtransfer bufferに戻すと思うけどその処理が一様にできていない。ムラがあるとか。 膜上にMeOHが残っている場合、ゲルに重ねたときゲル表面が固定されてその部分だけ転写されてないとか。。。 ニトロセルロース膜でも同じ問題が発生するか試して欲しいな。

(無題) 削除/引用 No.8008-5 - 2019/06/21 (金) 06:14:10 - おお あ、スポンジは関係なさそうです、こないだはちょっとタイト目のやつでやりましたし、、、

(無題) 削除/引用 No.8008-4 - 2019/06/21 (金) 06:12:52 - おお 泡はかなり気をつけているつもりなんですが、、、スポンジはウレタンフォームのスケスケのやつですが、コンタクトの仕方に問題があるんですかね。ろ紙をもう一枚加えてみます。 調整後のトランスファーバッファーは泡が発生しているの早めに作り、氷の入ったアイスバッケっとの上においてます。冷やして空気が溶け込むと良くないという意見もあるにはありますね。

(無題) 削除/引用 No.8008-3 - 2019/06/21 (金) 04:02:54 - こいけ エアバブルっぽいですよね。私もありました。これらがその対策になったかわかりませんが以下の2点を直しました。ウエットです。 トランスファーのスポンジを新しいものにかえる。 なんとなくスポンジがへたってたので新しいものにしました。きっちりサンドされればな、と。 泳導が終わってゲルと膜を重ねるときに使うトランスファーバッファーをあらかじめ冷やしておく。 ぬるいトランスファーバッファーを使ってセットしてから冷蔵でトランスファーすると電気を流しているときにカセッテからシュワシュワ空気が出ているような気がしてそれのせいか？と思ったので。あまり定かではないですが。。。

(無題) 削除/引用 No.8008-2 - 2019/06/21 (金) 03:23:37 - 遠さく推し 私の同僚（中国からの短期交換留学生）が一時期それに悩まされていました。 PVDF膜でしたね。 何が原因かはわかりませんが、いつしかまともなウエスタンができるまでになりました。

WB transfer 削除/引用 No.8008-1 - 2019/06/21 (金) 00:49:27 - おお 最近こういうのに悩ませれてます。経験されたり、それを解決したりされた方いませんか。 ちなみにPVDFをつかってます。 researchgate.net/post/How_can_I_minimize_the_air_bubbles_during_a_western_blot_wet_transfer

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