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βアクチン トピック削除
No.8007-TOPIC - 2019/06/20 (木) 20:10:27 - ながお
ウェスタンブロッティングについて質問です。

褐色脂肪細胞のβアクチンを測定しました。
結果、βアクチンのバンドの下にバンドが見られました。
これは、βアクチンのタンパク質が分解されたものなのでしょうか。
 
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No.8007-6 - 2019/06/23 (日) 11:17:11 - szdxfcgvhjk
リコンビナント(注:全長であること)か精製したβactinを購入して、1次抗体の反応時に反応液に10-100μg/ml加える。結果シグナルが消える or 薄くなるなら、取り敢えずアクチンの一部かサイズの異なるバリアントの可能性が高いということになり、重要なデータになるとおもう。
その抗体がIPできるならば、IPする。そのバンドが検出できらたらLC-MS/MSで分析して、分子種の同定、配列からアクチンのどの位置に相当するかが判明する。

(無題) 削除/引用
No.8007-5 - 2019/06/21 (金) 14:14:09 - おお
あれ、訂正になってないけど、ま多分言いたいことはわかってくれるだろう。

(無題) 削除/引用
No.8007-4 - 2019/06/21 (金) 09:23:49 - おお
訂正します

>また同じ抗原に関しても

また同じ抗原に関しても

(無題) 削除/引用
No.8007-3 - 2019/06/21 (金) 09:22:24 - おお
要因は4つ5つ可能性として思いつきます。また同じ抗原に関してもどこどこのはああだとか言われるのはなぜかということも考慮に入れてください。

研究であるかどうかに関わらず色々と可能性をかんがえて引き出すことが出来るようになるというのはスキルにつながるので少し自身で考えてみてはどうでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.8007-2 - 2019/06/20 (木) 21:27:17 - み
特異的にノックダウン処理して減少するなり、
わざとLysateを37度で保温してアクチンのバンドが減少して、下のバンドに収束するなり、
他のβアクチン抗体でも同様に検出されるかみるなり、色々と検討しないと分からない。
単純に考えればクロスリアクトを疑う。

βアクチン 削除/引用
No.8007-1 - 2019/06/20 (木) 20:10:27 - ながお
ウェスタンブロッティングについて質問です。

褐色脂肪細胞のβアクチンを測定しました。
結果、βアクチンのバンドの下にバンドが見られました。
これは、βアクチンのタンパク質が分解されたものなのでしょうか。

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