掲題の件で悩んでおります。
以前作製たBACトランスジェニックマウスBACのトランスジーンをバクボーンに、以前とは異なるcDNAを挿入し、マウスを作製しようと試みております。（ちなみに、以前作製したマウスは予想通りの発現パターンを示しておりました）
これまでに２０匹近くファウンダーマウスが得られておりますが、どれもtransgeneに挿れた遺伝子を発現していませんでした。
transgeneのシークエンス配列は問題ないことがわかっており、このトランスジーンをin vitroのエレクトロポレーションで細胞に導入すると、ちゃんと発現が認められます。
私はこれまで３ラインのトランスジェニックマウスを作製してきましたが、こんなに発現しないファウンダーが得られたのは初めてです。今までがたまたま運が良かっただけなのか（こういったケースはまれではなく、このtransgeneを使ってmicro-injectionをし続ければいつかは得られるのものなのか）、それとも何かtransgeneに思いもよらない欠陥があって発現しないのか、アドバイスを頂けたらと願っております。
ちなみに、今回発現させようと考えている遺伝子は、BAC上のexon1-exon2を相同組み換えで[遺伝子X-IRES2-GFP-kanamycin resistance gene]に置き換えております。以前は[遺伝子X-IRES2-GFP]の部分を[GFP]単独で置き換えたときのtransgeneで作ったマウスはうまく発現してくれました。（個人的にはIRES2があるとダメなんじゃないかという『気』がします。）
何卒、ご教授よろしくお願いいたします。 |
|
このスレッドをはてなブックマークに追加