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(無題) 削除/引用 No.7981-9 - 2019/06/15 (土) 01:00:39 - cherry おおさん、情報ありがとうございます。 実はどちらも既に見ていたのですが、論文の方は何やらイントロンと遺伝子が逆方向に入っているようで、「HIVが関わってないといけないのかな？これは汎用性に欠けそうなためダメそうだ」と詳しく読みもせず勝手に判断していたのですが、ひょっとしたら逆方向でも別に問題ないかもしれないので、もう少しちゃんと読んでよく考えてみるべきかもですね。 Addgeneのベクター情報の方は、他にもいくつかそれっぽいのがヒットしており、最初に見た2つぐらいが各配列のラベル等、詳しい情報が何もない感じだったので、おおさんに示していただいたのもじっくり見ずにスルーしていたのですが、こちらはきちんと情報が載っていましたね。 そして、miRNAをイントロンに挟み込んでいるようなので、まさに使えそうです。こちらの論文を辿ってみようと思います。 質問してよかったです、どうもありがとうございました！

(無題) 削除/引用 No.7981-8 - 2019/06/14 (金) 12:54:57 - おお https://www.addgene.org/59891/ https://jvi.asm.org/content/89/20/10591

(無題) 削除/引用 No.7981-7 - 2019/06/14 (金) 11:48:59 - cherry あ、入れ違いですみません。 GFPに関しては、こんな論文で、イントロンをGFP遺伝子内に入れているのが見つかりました。 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21544612 まぁ、おおさんのおっしゃる通り、強いイントロンであれば場所は問わず、スプライスサイトさえ正しく配置すれば、どこでも問題ないのかもしれないですね。一応、既報があればより心強いのですが…。

(無題) 削除/引用 No.7981-6 - 2019/06/14 (金) 11:42:33 - cherry 重ね重ねありがとうございます。 「（mCherryを）UTRになら比較的簡単に入れられる」＝「どこぞの遺伝子のイントロンに入れるのは、それよりは面倒くさい」というロジックでいただいた回答なのかな、と思いましたが、捉え違いだったのかもしれないですね。 （×：mCherryをUTRやイントロンに入れる／○：イントロンをmCherryに入れる…ということをお伝えしたかった感じです。） いずれにせよ、やりたいこととしましては、実はスプライシングうんぬんよりも、「興味のある機能性RNA低分子（修飾作用）をイントロンの形で発現させたい」（mCherryの活性で、そのRNA分子の活性が判別可能となっています）という形で、1つのプラスミドで調べたい分子と対象レポーターとを同時に発現させられる系を望んでいる感じです。 系の良否はともかくとして、上から「mCherryにイントロンを入れるとしたら、どこが良さ気か、既に使われている場所はあるか、調べてみて」と指示されたため、アイディアを募らせていただいたという次第でした。 何かありましたら、追って情報いただけると非常にありがたく存じます。

(無題) 削除/引用 No.7981-5 - 2019/06/14 (金) 11:31:45 - おお 振ってみたけど返事が来ないのは見てないからか、そうじゃないから。。。 目的がよくわからないのだけど、強いスプライシングサイトは必ずといっていいほどスプライシングされるし、弱いスプライシングサイトは組織特異的だったりしてされたりされなかったりだし。 なにか細胞がスプライシングに関与する遺伝子などの変異があってスプライシングがうまくされないとかそういうのを調べたいのかな、、、 ＞GFPならいくつか見つかるのですが…。 その文献とか示したら考えている実験について察しが付くかも。

(無題) 削除/引用 No.7981-4 - 2019/06/14 (金) 09:58:25 - おお >「どこぞのイントロンにmCherryを入れる」 なんて言ってないけど、、、 ま、いいや。でなんか調べたいスプライシングサイトがあるってこと？

(無題) 削除/引用 No.7981-3 - 2019/06/14 (金) 09:18:00 - cherry おおさん、早速の回答ありがとうございます。 ちょっと質問の仕方が悪かったんですが、やりたいことは「どこぞのイントロンにmCherryを入れる」ではなく、全く逆で、「mCherryにイントロンを入れる」という感じになります（いわば、正しくスプライシングされることを、mCherryの発現によって確認したい）。 改めて、mCherryのどこかにイントロンが入った形のコンストラクトが使われているのを見たことがある方いらっしゃいましたら、アドバイスいただけると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.7981-2 - 2019/06/14 (金) 09:04:44 - おお UTRになら比較的簡単に自分で入れることはできると思いますが。

イントロンの入ったmCherry 削除/引用 No.7981-1 - 2019/06/14 (金) 08:30:16 - cherry 諸般の事情で内部にイントロンの入ったmCherryをレポーターとして用いたいのですが、軽く調べた限りではイマイチ汎用的なものが見つかりません。GFPならいくつか見つかるのですが…。 どなたか、見た記憶がある、もしくは使ったことがあって実際機能した、などの意見がありましたら、ご助言いただけると大変ありがたく存じます。

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