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(無題) 削除/引用 No.7956-12 - 2019/06/10 (月) 07:35:19 - heita311 遠さく推し様 教えていただいてありがとうございます。 次のlittematesで試してみます。 本当に有難うございました。

(無題) 削除/引用 No.7956-11 - 2019/06/10 (月) 03:09:21 - 遠さく推し > 脱色のエタノールは95%でされておられますか？ アルシアンブルーの後の脱色は70％です。6-8時間か、オーバーナイト（室温）です。 その間、数回替えています。 > アルシアンの8GXの濃度は同じでしょうか？ 濃度は0.015％です。氷酢酸は15％でした。 （アルシアンブルー粉末15mg、100％エタノール85ml、氷酢酸15ml）を作っています。 > アルザリンの後には脱色はされていないと思うのですが、KOHにつけておくと段々と全体の褐色〜紫色が抜けてくるものなんですか？ 抜けてきます。私は1％KOHで根気よく3日ほど（状況を見て一週間ほど）脱色とダンパク質除去をしています。毎日一度は替えています。 その後はグリセリンを加えて保存という流れです。

(無題) 削除/引用 No.7956-10 - 2019/06/09 (日) 06:28:05 - heita311 誤字です。 すみません？ →すみません。

(無題) 削除/引用 No.7956-9 - 2019/06/09 (日) 06:25:38 - heita311 遠さく推し様 > アルシアンブルーの後にエタノールで脱色していますね。一晩です。 ありがとうございます。実行してみます。 すみません？さらにお聞きしたいのですが、 脱色のエタノールは95%でされておられますか？ アルシアンの8GXの濃度は同じでしょうか？ アルシアンの氷酢酸の濃度は全体の10%程度でされておられるのですか？ アルザリンの後には脱色はされていないと思うのですが、KOHにつけておくと段々と全体の褐色〜紫色が抜けてくるものなんですか？ 厚かましく色々聞いて申し訳ありません。 教えて頂けると幸いです。何卒よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.7956-8 - 2019/06/09 (日) 02:36:11 - 遠さく推し アルシアンブルーの後にエタノールで脱色していますね。一晩です。

(無題) 削除/引用 No.7956-7 - 2019/06/08 (土) 13:52:42 - heita311 AP様 > その実験の経験はないですが、染物の一般論です。 > 色素の濃度を下げて染色時間を伸ばすと、選択的に染まるべきものは染まるけど、それ以外は染まらなくなるので、S/Nがあがります。色素の濃度を1/10くらいにして、数日単位で様子を見ながら染めてみてはいかがでしょう。 誠にありがとうございます。 アリザリンの濃度を薄くして、長く漬けてみるのも試してみます。 なかなかうまくいかず途方に暮れていたのですが、良いご意見いただき本当にありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.7956-6 - 2019/06/08 (土) 13:49:28 - heita311 遠さく推し様 > E18.5で行なっていますが、綺麗にいっています。 > > KOHがタンパク質を除去してくれますね。 > > アルシアンブルーの氷酢酸の濃度は正しいですか？多過ぎませんか？ > > アリザリンレッドは濃度は私のと一緒ですが、木になるのがアルシアンブルーの前にエタノールで脱色しないのですか？ ありがとうございます。氷酢酸の濃度を少し薄めてみます。 アルシアンブルーの前は、エタノールで固定、アセトンで脱脂したのみでアルシアンブルーに移行していました。 アルシアンブルーの前に、(脱脂の後もう一度)95%エタノールで1日ほど、脱色されておられるのですか？ もし差し支えなければ教えていただけると幸いです。 何卒よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.7956-5 - 2019/06/08 (土) 13:38:00 - heita311 学部生様 > 透明標本作ったことないんで、的はずれかもしれませんが、トリプシン等でタンパク質の消化は行わないんでしょうか？ ご意見誠にありがとうございます。KOHで蛋白の分解過程を行っております。

(無題) 削除/引用 No.7956-4 - 2019/06/08 (土) 11:38:27 - AP その実験の経験はないですが、染物の一般論です。 色素の濃度を下げて染色時間を伸ばすと、選択的に染まるべきものは染まるけど、それ以外は染まらなくなるので、S/Nがあがります。色素の濃度を1/10くらいにして、数日単位で様子を見ながら染めてみてはいかがでしょう。

(無題) 削除/引用 No.7956-3 - 2019/06/08 (土) 10:45:35 - 遠さく推し E18.5で行なっていますが、綺麗にいっています。 KOHがタンパク質を除去してくれますね。 アルシアンブルーの氷酢酸の濃度は正しいですか？多過ぎませんか？ アリザリンレッドは濃度は私のと一緒ですが、木になるのがアルシアンブルーの前にエタノールで脱色しないのですか？

(無題) 削除/引用 No.7956-2 - 2019/06/08 (土) 03:16:29 - 学部生 透明標本作ったことないんで、的はずれかもしれませんが、トリプシン等でタンパク質の消化は行わないんでしょうか？

マウス透明骨格標本作成に関して 削除/引用 No.7956-1 - 2019/06/06 (木) 10:02:31 - heita311 研究歴の浅い医学系大学院生の者です。 マウスのE16.5とP0の透明骨格標本を作製したいのですがうまくいきません(近くにやっている人がおらず、laboで確立されたprotocolもありません)。 以下のprotocolで行っているのですが �@PBSでwash �A眼球、すべての皮膚、内臓の除去 �B95%エタノールで固定(室温、O/N) �C100%アセトンで脱脂(室温、O/N) �Dアルシアンブルー溶液(下記)で染色(室温、O/N) ※60mgのアルシアンブルー8GX＋100%エタノール160ml＋100%Glacial Acetic acid40mlを混ぜてフィルターで濾したものを使用 �Fアリザリンレッド溶液(下記)で染色(4度、O/N) ※10mgアリザリンレッド＋200mlの1%KOH(KOH2g＋DW200ml)、フィルター �G 1%KOH 3-4日間室温 �H 50%グリセロール溶液(1%KOH溶液で希釈)2日間室温 �I 100%グリセロール溶液で2-3日間 アリザリン中に黒焦げ(非常に濃い紫のような感じ)のような色になってしまい、最後まで全身青が残ってしまいうまく作成できないことが続いています。 アリザリンの時間を短くしたりしてみるのですがなかなかうまくいかず困っております。 もし、こういったことが原因ではないかというのがお分かりの方がおられれば、ご教示いただけないでしょうか。 お忙しいところ申し訳ありません、よろしくお願いします。

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