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局在シグナルの位置 トピック削除
No.7916-TOPIC - 2019/05/24 (金) 18:17:39 - MARCKS
培養細胞に対し、目的遺伝子の下流にeGFPもしくはtdTomatoをノックインしたレポータ―ラインを作成しています。
核への移行シグナルとしてNLS、細胞膜への移行シグナルとしてMARCKSシークエンスを用いています。コンストラクトをみるとNLSは蛍光遺伝子の下流にあり、MARCKSは蛍光遺伝子の上流にあるのですが、これは基本的な規則なのでしょうか?NLSが上流に、もしくはMARCKSが下流に位置しても、局在化シグナルとして機能するものなのでしょうか?
初歩的な質問で申し訳ありません…
 
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(無題) 削除/引用
No.7916-3 - 2019/05/24 (金) 21:41:43 - MARCKS
APさん
有難うございます。MARCKSのN末端がミリストイル化されることで細胞膜に結合できるので、MARCKSのN末端を空けておく必要があるということですね。
勉強になりました。有難うございます!

(無題) 削除/引用
No.7916-2 - 2019/05/24 (金) 19:39:32 - AP
ただのアミノ酸配列とそれに付けられた名前という記号としてしか捉えてないんじゃないか? そいつらがどういう働きを持って局在化に寄与しているのか、勉強するといくつも賢くなると思う。

MARCKSのはミリストイル化のよる膜アンカーだと思うけど、だとしたらN末端しかありえない。
https://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%83%9F%E3%83%AA%E3%82%B9%E3%83%88%E3%82%A4%E3%83%AB%E5%8C%96
NLSの位置はかなり自由度が高かったと記憶する。

局在シグナルの位置 削除/引用
No.7916-1 - 2019/05/24 (金) 18:17:39 - MARCKS
培養細胞に対し、目的遺伝子の下流にeGFPもしくはtdTomatoをノックインしたレポータ―ラインを作成しています。
核への移行シグナルとしてNLS、細胞膜への移行シグナルとしてMARCKSシークエンスを用いています。コンストラクトをみるとNLSは蛍光遺伝子の下流にあり、MARCKSは蛍光遺伝子の上流にあるのですが、これは基本的な規則なのでしょうか?NLSが上流に、もしくはMARCKSが下流に位置しても、局在化シグナルとして機能するものなのでしょうか?
初歩的な質問で申し訳ありません…

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