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ウエスタン:HIF-1 alpha
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No.79-TOPIC - 2012/01/24 (火) 21:27:28 -
低酸素誘導男
様々な組織由来のタンパク試料から、HIF-1 alphaのウエスタンを試みているのですが、97kDaにバンドが出ません。
70kDa付近にはそれらしいバンドの発現変化が見られるのですが、サイズが随分異なります。
HIF-1 alphaは体内では非常に分解が早いと思うのですが、やはりサンプル作成中に分解してしまったのでしょうか?
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No.79-4 - 2013/01/27 (日) 21:16:56 - kY
分解が早いというか、通常の状態だとすでに分解されているのではないでしょうか。マウスをプロテアソームインヒビターや低酸素状態にして発現を上げてあげないとほとんどみえないのではないとかと思います。少なくともポジコンとしてそういった細胞でも必要だと。
(無題)
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No.79-3 - 2013/01/27 (日) 12:14:25 - 通りすがり
HIF-1aは低酸素下で高発現しますよね?
恐らくですが、サンプル調製中に分解してしまったのではないかと私も思います。
出来るだけ、ステップを簡略化する方法を模索する必要がありそうですね。
低酸素下で作業はできませんし…。
(無題)
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No.79-2 - 2012/01/24 (火) 21:31:52 -
低酸素誘導男
追加です
HIF1aに対しするウエスタンブロットには、どの抗体がおすすめかも教えていただければ幸いです。
よろしくお願いします
ウエスタン:HIF-1 alpha
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No.79-1 - 2012/01/24 (火) 21:27:28 -
低酸素誘導男
様々な組織由来のタンパク試料から、HIF-1 alphaのウエスタンを試みているのですが、97kDaにバンドが出ません。
70kDa付近にはそれらしいバンドの発現変化が見られるのですが、サイズが随分異なります。
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