いつも勉強させてもらっています。
細胞内リン酸化タンパク質をフローサイトで検出するためのチップスをお尋ねしたいです。
当方、培養細胞を血清刺激した際のERKのリン酸化をフローサイトメトリーで検出した経験があります。
この度、胎児期の脳組織や胎児期の肺に含まれる特定の細胞（血球）で細胞内リン酸化をフローサイトで見たいです。
これまで組織でこの手の実験を行ったことがないため実際に行う前に少し感覚をお聞きしたいです。
まず、胎児期とは言っても組織ですので、シングルセルにする必要があります。
その際に酵素処理は避けられないとは思いますが、その中でできるだけ穏やかに組織を破砕する方法はありませんでしょうか？
4型コラゲナーゼ、ディスパーゼ、トリプシン、色々な酵素があるかと思いますが、どういった方法がお勧めでしょうか？やはりメカニカルな処理、酵素処理では細胞内シグナルが入ってしまいそうで...もちろん組織を破砕する前に組織をPFAで固定して細胞内シグナルの導入を止めてしまえばいいとは思いますが、固定してしまうとシングルセルにできないのではとの懸念もあり、ここで質問させていただければと思いました。
FAQかもしれませんが、ご教示いただけますと幸いです。 |
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