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ImageJを用いた二重染色の解析方法 トピック削除
No.7879-TOPIC - 2019/05/09 (木) 16:13:42 - SP
お世話になっております。
現在、核内輸送キャリアの開発実験を行っておりまして、FITCでラベル化したキャリアとヘキストの二重染色で核の位置を確認し、細胞内動態をコンフォーカルで観察しています。
位相差&ヘキスト&FITCのMergeの写真からFITCの蛍光強度だけ抽出してImageJで解析する方法はありますでしょうか?

Make Composit 処理を行うと、位相差の白色にも緑を割り当てられMerge全体が緑になる問題に当たりました。

なにかよい方法があるのであればご教授願いたいです。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7879-5 - 2019/05/09 (木) 18:11:57 - wwn
qqさんと完全に同意見ですが、もう一つ確認を。

>各チャンネル(ヘキスト・FITC・位相差・merge)が一つになったtif画像

これはmulti tiffでなく、マージされた画像なのでしょうか。
マージするとおそらくRGB画像になってしまって文字通りマージされてしまい、各チャンネル本来の輝度情報がなくなってしまいます。というわけです。

(無題) 削除/引用
No.7879-4 - 2019/05/09 (木) 17:49:50 - toto
mergeされた蛍光顕微鏡写真の色分解はSplit Channelsを使います。あっさり緑赤青に色分解されますよ。

(無題) 削除/引用
No.7879-3 - 2019/05/09 (木) 17:18:01 - SP
> Mergeの写真になっていれば、それは困難だと思いますが、きっと別々のチャンネルに格納された画像データなのですよね?
> そうであれば、FITCのチャンネルだけを測定すれば良いことになります

キャリアをエレクトロポレーションで導入し、経時変化による細胞質-核間の核内移行度・核外移行度を蛍光強度で定量したいため、Mergeで行おうと思ってました。各チャンネルの画像データはあります。

> 状況が少しわからないところがありますが、
> image>color>make compositeしたあとで、
> image>color>channel_toolを開くと、
> 各チャンネルの色割当の指定ができます。位相差のチャンネルが緑に指定されていれば、channel-toolのmoreでgrayに変更して、更にbrightness-contrastで明るさを適当に加減すればよいのです。
> channel-toolの位相差のチャンネルを切ってしまえば、それだけでも良いと思います。

各チャンネル(ヘキスト・FITC・位相差・merge)が一つになったtif画像をImageJで開いてMake compositした後、split channelすると位相差とMergeの画像のバックが緑になります。splitする前のmerge画像と処理後で測定した値が同じ値で出たため、バックを含んだ値が出たんだとわかりました。

バックの緑を除去する方法か、Mergeで範囲指定した領域を十字キー以外の方法FITCのチャンネルまですばやく移動させる方法があるのではないかと思い、質問しました。

(無題) 削除/引用
No.7879-2 - 2019/05/09 (木) 16:49:19 - qq
>位相差&ヘキスト&FITCのMergeの写真からFITCの蛍光強度だけ抽出し
>てImageJで解析する方法はありますでしょうか?
Mergeの写真になっていれば、それは困難だと思いますが、きっと別々のチャンネルに格納された画像データなのですよね?
そうであれば、FITCのチャンネルだけを測定すれば良いことになります。

>Make Composit 処理を行うと、位相差の白色にも緑を割り当てられ
>Merge全体が緑になる問題に当たりました。
状況が少しわからないところがありますが、
image>color>make compositeしたあとで、
image>color>channel_toolを開くと、
各チャンネルの色割当の指定ができます。位相差のチャンネルが緑に指定されていれば、channel-toolのmoreでgrayに変更して、更にbrightness-contrastで明るさを適当に加減すればよいのです。
channel-toolの位相差のチャンネルを切ってしまえば、それだけでも良いと思います。

ImageJを用いた二重染色の解析方法 削除/引用
No.7879-1 - 2019/05/09 (木) 16:13:42 - SP
お世話になっております。
現在、核内輸送キャリアの開発実験を行っておりまして、FITCでラベル化したキャリアとヘキストの二重染色で核の位置を確認し、細胞内動態をコンフォーカルで観察しています。
位相差&ヘキスト&FITCのMergeの写真からFITCの蛍光強度だけ抽出してImageJで解析する方法はありますでしょうか?

Make Composit 処理を行うと、位相差の白色にも緑を割り当てられMerge全体が緑になる問題に当たりました。

なにかよい方法があるのであればご教授願いたいです。
よろしくお願いします。

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