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(無題) 削除/引用 No.7832-3 - 2019/04/19 (金) 07:33:10 - AP RNAでしょう。 カラム法といっても、シリカのとイオン交換樹脂のものがあります。 溶出液をアルコール沈殿するということからイオン交換方式だと思います。 シリカだとRNAもプラスミドに混じって溶出されてきますが、イオン交換法だと両者を分離することができます。だからRNAの混入が見られなかったのでしょう。 多くのキットではアルカリ溶菌の段階でRNaseを効かせるようになっていますが、この段階ではあまり効きが良くない。条件によっては十分分解されないこともあるでしょう。その状態で沈殿したらRNAも見えるくらい取れてきます。 精製したプラスミド混入したRNAを除くには、溶媒のTEのに10 ug/mL程度のRNase Aを入れておくとか(多くの用途ではRNaseは入れっぱなしで構わない)、PEG沈殿をしたら良いです。

(無題) 削除/引用 No.7832-2 - 2019/04/19 (金) 05:52:51 - おお たぶんRNAでしょう。ミニプレップでも条件によっては見られると思います。

mini prep vs midi prep 削除/引用 No.7832-1 - 2019/04/19 (金) 01:59:43 - 素朴な疑問 こんばんは。 mini prepはP1からP3で大腸菌を処理し、遠心、イソプロ沈殿、エタ沈でTEで溶解ですが、 midi prepでは、P1からP3で大腸菌を処理し、遠心、上清をキアゲンカラムに供し、イソプロ沈殿、エタ沈でTEで溶解しています。 今回、大腸菌プレートに一面に生えた大腸菌からプレップするため、ミニプレップを行いました。 大腸菌ペレットがやや多かったので、P1等の溶液をミディプレップレベル（各2ml）で行いました。 つまり容量を増やしたP1からP3で大腸菌を処理し、遠心、イソプロ沈殿、エタ沈でTEに溶解させました。 ところが思いの外、エタちんのペレットが大きく、電気泳動すると数百bpほどのバンドが多くを占めました。 これは未分解のRNAなどでしょうか？ならばなぜ、通常のミニプレップではこのバンドは認められないのでしょうか？ 素人的な質問だとは思いますが、よろしくお願いします。

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