AP様、~様へ
結果報告が遅くなりました。
重ね重ねの丁寧なアドバイス、誠にありがとうございました。
検出目的のバンドは、通常のBL6が6kbp,flox/floxが7kbp,ノックアウトが10kbpとかなり大きめのバンドの検出を目的としていました。
自分の場合は対象のマウスに完全な野生型のマウスを含んでおり、肝・脳・筋・尾と色々な臓器で試しましたが、やはり自身のプローブでは目的のバンドを検出できませんでした。
そこで、アドバイスの中にあった他の同僚のプローブを使用するというのを行ってみたところ、
1kbp前後に明瞭なバンドを検出することができました。
このため、少なくとも制限酵素処理とブロッティングまでは上手く行えていることが確認できたと考えています。
wash時間は実は6時間まで増やしてみたのですが、やはり全体的に薄くなるだけで検出できずでした。
どうやらプローブに問題があるのではという気がしてきています。
一応もともとのノックアウトマウス作成元から頂いたプローブではあったのですが…
このため、残りのプローブをシーケンスして目的とする配列をきちんとふくんでいるかどうかを再検討してみようと考えています。
とりあえずご報告までです。
色々とアドバイスを頂きありがとうございました。知らないことも多く、大変勉強になりましたm(_ _)m |
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