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(無題) 削除/引用 No.780-7 - 2012/07/24 (火) 23:33:27 - こたろう ありがとうございます。 研究室にセルソーターがないので、MACSでしかMDSC取れないんですよ。回数増やして、純度は高めるようにしてみます。

(無題) 削除/引用 No.780-6 - 2012/07/23 (月) 13:50:21 - ねこ 私はOT-1は使用したことがありませんが、CD3/CD28抗体を用いてMDSCのT細胞抑制機能の実験をしたことがあります。 そのときは、APCは特にいれませんでしたが…。 私はセルソーターを用いて分離を行い、MDSCの純度は90％以上あったと思います。

(無題) 削除/引用 No.780-5 - 2012/07/22 (日) 13:45:03 - こたろう ありがとうございます。論文ではOT-1脾細胞からCD8のみ分離して使用している方が多いですが、脾細胞をそのまま用いている方もみえるので、大丈夫かなと思ってるのですが。 それでは、APCとして、BMDCやBMDMを加えたら良いですか？ちなみに、どれ位の割合で入れるものなのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.780-4 - 2012/07/22 (日) 10:44:46 - weq ＭＤＳＣの作用機序に詳しくないのですが、 Ｔｒｅｇと同じように考えるのであれば、 ＡＰＣ＋ペプチド＋ＯＴ−１（Ｔ細胞） にＭＤＳＣを加えるのが普通のようが気がしますが。 脾臓細胞のＡＰＣ活性が弱いことはないでしょうか。 ＯＴ−１のＭＡＣＳなどによる分離は必要ないですか。

(無題) 削除/引用 No.780-3 - 2012/07/22 (日) 09:45:58 - こたろう ありがとうございます。 抗原はOVAペプチドをいれています。APCはとしては何も入れていません。 OT-1脾細胞とOVAペプチドのみで増殖が得られてるんで、そこにMDSCを加えたのですが、APCも入れないとダメなんですか？具体的に何を加えれば良いでしょうか？ よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.780-2 - 2012/07/22 (日) 01:54:23 - TK-1 抗原とAPCはどうしているんですか

MDSCのT細胞増殖抑制機能の測定 削除/引用 No.780-1 - 2012/07/21 (土) 22:14:54 - こたろう 担癌マウスの脾細胞由来のMDSCとOT-1マウス脾細胞を共培養して、T細胞増殖抑制機能を測定したいです(CFSE増殖アッセイ、チミジン取り込みアッセイ)。論文で報告されているように、MDSCの割合を減らして行くと、OT-1の増殖が回復して来ません。具体的には、2:1(OT-1脾細胞:MDSC)のとき一番増殖して、4:1、8:1のと増殖が減って行ってしまいます。つまり、MDSCが増殖を助けるように働いています。 担癌マウスの脾細胞よりGr-1+をMACSで抽出します。Gr-1/CD11bの純度は70%程度でした。そして、OT-1の脾細胞とともに96wellプレートで共培養します。OT-1脾細胞は5x10の5乗/wellとし、MDSCを2:1、4:1、8:1で入れます。1日培養後チミジン取り込みアッセイ、3日培養後にCFSE増殖アッセイを測定します。 何度か繰り返してますが、いつも同じような結果になってしまいます。問題点があるのでしたら、教えて頂けたら幸いです。よろしくお願いします。

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