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(無題) 削除/引用 No.7781-5 - 2019/03/25 (月) 08:53:44 - T-2 PayPay 様 ありがとうございます。 おっしゃる通り石灰化、遺伝子導入で確認するのは実験上難しいです。 やはりオステオカルシンかプロコラーゲンのELISAで確認したいと思います。

(無題) 削除/引用 No.7781-4 - 2019/03/21 (木) 14:33:18 - PayPay 石灰化誘導培地で誘導していれば、通常の位相差顕微鏡で石灰化の程度が大体分かりますが、、、 ただ、きっと今回はそうなる前に分化の程度を知りたいのですよね。 やったことはないですが、培地でのオステオカルシンはどうでしょう。 上清のOCをELISA測定。 もしくは、プラスミドなど入れて良ければ、1型コラーゲンやオステオカルシンのプロモーター下でGFPを発現するベクターを導入し、そのGFPの発現程度を分化の程度とするか。

(無題) 削除/引用 No.7781-3 - 2019/03/20 (水) 11:07:19 - T-2 ぺんぺん様 レスありがとうございます。 確かに培地中のALP活性を測定している文献はあります。 骨芽細胞のALPは膜結合型だと思っていたのですが、wikiによると 一部分泌されるそうなので、一度試してみようと思います。 その他、なにかアイデアがあれば宜しくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.7781-2 - 2019/03/20 (水) 03:33:47 - ぺんぺん 培地中のアルホス活性を測定している論文をちょくちょく見ますので、アルホスを提案しようとしたのですが、リン酸塩が問題となるとは知りませんでした。 1型コラーゲンなどもELISAになりますもんね。。

経時的な骨芽細胞分化の確認について 削除/引用 No.7781-1 - 2019/03/19 (火) 18:48:12 - T-2 パスワードを設定する前に送信してしまいましたので 再度貼らせていただきます。 いつも参考にさせていただいています。 現在、骨芽細胞株を用いた分化の検討をおこなっているのですが、 細胞を生存させたまま培養上清で経時的に分化状態を 確認したいと考えております。 できればELISAよりも安価で行える方法を調べているのですが、 アルカリフォスファターゼ活性は培地中のリン酸塩の影響で難しそうです。 なにか良いアイデアはありますでしょうか。 宜しくお願い致します。

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