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(無題) 削除/引用 No.7754-4 - 2019/03/11 (月) 18:46:21 - 独り言 mRNAが100％分解されるほど効率のよい分解系ではないと思うので、PCRならバンドが見えるでしょう。 リアルタイムPCRなら減少が捉えられるかもしれないけど、リアルタイムPCRは未熟な人がやると、結果がばらついて困ることが多々あります。 KOしたのであれば、ちゃんと抗体を手に入れて、ウエスタンしないと、いつまでたっても本当にKOされてない疑惑を拭えないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.7754-3 - 2019/03/11 (月) 16:32:36 - AP >バンドは見えない（PCRはかからない）と考えて良いのでしょうか？ Primerの設計でPCRがかからないようにする工夫でもしなければ、見えると考えるべきです。 NMDだってprematureな終止コドンがある変異転写産物量は野性型に比べて少ない、ってことから見つかったわけで、完全に消えるわけじゃありあｍせん。

(無題) 削除/引用 No.7754-2 - 2019/03/11 (月) 16:11:22 - おお yes

ノックアウト個体由来のcDNAを用いたPCR 削除/引用 No.7754-1 - 2019/03/11 (月) 15:42:58 - xxx 初歩的な話をお聞きしてすみません。 例えば、遺伝子AをCRISPRでノックアウトした（フレームシフト変異あり）マウスの脳からtotal RNAを抽出し、そこからReverTra Ace qPCR RT kitでcDNAを合成したとして、そのcDNAを用いて遺伝子Aに対するprimerでPCRを行い、その産物を電気泳動に流した場合、バンドは見えない（PCRはかからない）と考えて良いのでしょうか？ 一般的に、フレームシフト変異を持つmRNAは不良品として分解され、タンパク質への翻訳は起こらないと思いますが、その分解を免れた場合、フレームシフトを持つmRNAからは、読み枠がずれることによりすぐに終止コドンが現れ、機能を持たないタンパク質断片だけが翻訳されると思いますが、後者の場合（分解を免れた場合）ではPCRがかかり、バンドが見えるということもありえるでしょうか？

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