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(無題) 削除/引用 No.7664-2 - 2019/02/07 (木) 14:16:02 - おお 位置関係がよく分からないのですが、ケミルミの反応が強いとその部分は（たぶん酸化とかで）つぎの検出で反応が進まなくなってしまう事があります。 一次抗体や二次抗体の量を検出できる範囲内で減らしてみるといいかもしれません。のせる量も減らしてもいいかもしれません。 リプロービングのためのStrippingはマイルドなほうがCarry overがない限り安心できますけど、どうでしょうかね。とくにニトロセルロースだと。個人的にはシグナルが弱いほうを先に検出してよりマイルドな方法で剥がすようにしています。一番マイルドなときは泳動バッファーを使ってます。 ＞14.4M 2-Mercaptoethanol ＞10% [w/v]SDS ＞1M Tris-HCl[pH6.7] これは使った原液の試薬ですよね、、、 https://www.researchgate.net/post/I_want_to_strip_a_western_blot_Can_you_suggest_an_efficient_method

大動脈のウエスタンブロットについて 削除/引用 No.7664-1 - 2019/02/07 (木) 11:55:35 - K こんにちは 現在大学院生です。 大動脈のウエスタンブロットについてお尋ねしたいです。 現在ラット大動脈にてp-enosとenosを測定しようと試みているのですが、 p-enosをリプロービング後にenosを測定するとenosの部分だけバンドが消えてしまいます。 リプロービングなしでp-enos、enos（それぞれ×400倍 p-enos：sc136519、enos：sc136977）共にバンドの検出が確認できているので抗体の問題ではないと思います。 そこで、 �@リプロービングバッファーの組成がenosに合わないのか �Aリプロービングをすることでバンドの位置がずれることはあるのか をお尋ねしたいです。 ちなみにリプロービンバッファーの組成は以下のようになっています。 14.4M 2-Mercaptoethanol 10% [w/v]SDS 1M Tris-HCl[pH6.7] MilliQベース どなたかこ教授いただけますと幸いです。 よろしくお願いいたします

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