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(無題) 削除/引用 No.7643-4 - 2019/02/03 (日) 16:55:33 - バイオ初心者 ＞しい さん 24時間ごとの分析についてご提案、ありがとうございます。 いくつか参考書などを確認してみましたが、比色管を用いて50mLにメスアップした後、吸光光度計で測定する方法が記載されていました。 しかし、100mLの液体培地で培養を行っているため、24時間ごとに数mLの採取を繰り返すのは適切ではないと考えています。 そこで、現在参考にしている論文では以下のような手順が挙げられています。 １）250 μLの培養液を1 mLの0.1M リン酸カリウム緩衝液（pH=8.0）と2.5 mLの0.1M尿素へ加え、37℃で5分間培養する。 ２）上記の溶液へ、phenol nitroprussideとアルカリ性の次亜塩素酸を各1 mLずつ添加し、37℃で25分間培養し、吸光度を測定する。 この方法では吸光度から培養液250 μL中に含有しているアンモニウムイオンが定量されるという解釈で良いのでしょうか？ 定量する際に、値の変換などは必要になりますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.7643-2 - 2019/02/02 (土) 22:39:24 - しい 24時間ごとに培地を一部採取して、アンモニウムイオンを定量するのが良いと思います。もし、24時間ごとに、定量用の発色液を作成し、都度測定するのが難しい場合は、採取した培地を都度凍結保存しておきた、あとでまとめて測定をすれば楽だと思います。 培地中ではないですが、以前に植物の水耕培養液で同様の手法でアンモニウムイオンを定量しておりました。

インドフェノール法によるアンモニウムイオンの分析 削除/引用 No.7643-1 - 2019/02/02 (土) 15:03:37 - バイオ初心者 現在、ウレアーゼ活性を有する細菌の培養を行っています。 それらの細菌のウレアーゼの酵素活性を知りたいです。 細菌を培養している液体培地へ尿素を添加し、ウレアーゼにより加水分解されたアンモニウムイオンをインドフェノール法で定量したいのですが、インドフェノール法について調べてみてもよく分かりません。 また、例えば24時間おきに液体培地中のアンモニウムイオンをインドフェノール法で定量する際には、24時間おきに液体培地から試料を採取して分析を行うのでしょうか？あるいは、インドフェノール法に用いる試薬と混合した状態で、目的とする時間が経過したら分析を行うのでしょうか？ 質問の意味が分かりづらくて申し訳ないですが、どなたかご存知の方いらっしゃいますか？

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