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(無題) 削除/引用 No.7634-6 - 2019/02/06 (水) 07:28:18 - aap ペンペン様 遅くなり申し訳ありません。 なるほど、結合から離れて再結合という流れもあるのですね。 ご教示いただき有難うございます。 TK-1様 ありがとうございます。mouse serumを使えばかなり2次抗体は除去できますね。 ぜひ試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.7634-5 - 2019/02/02 (土) 05:47:53 - TK-1 ２次交代で染めた後に、mouse serumで残存の二次抗体を吸収。

(無題) 削除/引用 No.7634-4 - 2019/02/02 (土) 02:54:48 - ペンペン ぺんぺんです。 ＞染め方を変更して、未標識1次抗体→蛍光標識二次抗体→蛍光標識1次抗体、の順番で染めればフリーの二次抗体を洗浄で除く事が可能なので、CD3やCD4が染まることは無いと思います。 私の理解で、ですが、この手順でもCD3やCD4は程度問題ですが染まると思います。 なぜなら抗原抗体反応は共有結合ではないですので、付いたり離れたりをしています。 なので二次抗体がCD3やCD4のプライマリ抗体に結合相手を変えることは起こります。 なので、私ならそもさんの先染めのあと、二次抗体を除いてから細胞を固定します。 そのあとに標識CD3/4抗体を加えますね。うん。 以上ペンペンからでした。

(無題) 削除/引用 No.7634-3 - 2019/02/02 (土) 00:31:19 - aap そも様 ありがとうございます。 教えていただいた手順でtryする方向で検討します。

(無題) 削除/引用 No.7634-2 - 2019/02/01 (金) 03:06:40 - そも 標的蛋白に対する抗体だけ未標識という事ですね。 1次抗体mix→anti-mouse IgG抗体だと全ての抗体に結合します。 染め方を変更して、未標識1次抗体→蛍光標識二次抗体→蛍光標識1次抗体、の順番で染めればフリーの二次抗体を洗浄で除く事が可能なので、CD3やCD4が染まることは無いと思います。

FACSでの一次抗体と二次抗体について 削除/引用 No.7634-1 - 2019/02/01 (金) 02:22:21 - aap 初めまして フローサイトメトリー 初心者です。 リンパ球のある細胞内蛋白をFACSで解析予定なのですが、その蛋白への抗体は標識されておらず二次抗体が必要となっています。 ただ問題は蛋白への抗体の宿主がmouseで、かつ同時に染めようと思っているCD3やCD4と同一宿主である事です。 二次抗体(Goat anti-mouse IgG抗体)がこれらのmouse宿主由来のCD3、CD4、CD8抗体(いずれもmouse IgG由来、標識済み)に反応するのでしょうか？ 実際試してみるのが早いとは思うのですが 資金の関係で抗体を揃える事ができず、試すまでは至っていません。。 周囲に相談できる人がおらず、稚拙な質問で申し訳ないのですが どなたかご存知の方、アドバイスお願い致します。

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