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(無題) 削除/引用 No.7593-5 - 2019/01/23 (水) 13:30:07 - ぺんぺん ほとんどは経験論だと思います。すみません科学的な見地からのコメントではなくて...。

(無題) 削除/引用 No.7593-4 - 2019/01/23 (水) 09:11:33 - 免染太郎 御丁寧な返信ありがとうございます。 これは、生のお話を聞かないと分からないことですね。 さらに追加でお聞きしたいのですが、 賦活化を2種類（酸とクエン酸での加熱）加えたプロトコールですが、 こういったこともあるのですよね。 何故この組み合わせなのかは、理論で考えられるものではなく、組み合わせを試したら、たまたまこの方法がうまくいったということですよね。

(無題) 削除/引用 No.7593-3 - 2019/01/22 (火) 21:30:09 - AP POの不活性化が必要かどうかは、対象物にPO活性があるかないかによります。 もともと活性のない組織だとか、前処理の段階で不活性化している場合には必要ないのは当然ですね。 パラフィン包埋なんかでは酵素活性を残存させる方が難しいくらいですし、エピトープの暴露処理もやっていることはタンパク質の変性ですから、酵素のが死ぬ可能性は高い。 逆に、不活性化処理の過酸化水素やメタノールで、ダメになる抗原もある。 ブロッキングステップがおまじないだということはしばしば言われていて、省いたプロトコールも(市販品のマニュアルなんかでも)見うけられます。 抗体の希釈液にブロッキング剤を入れているはずで、それで十分なことが多い。

ペルオキシダーゼの不活性化とblockingのステップ 削除/引用 No.7593-1 - 2019/01/22 (火) 17:25:15 - 免染太郎 他のラボから、ボス経由でDABを使った免疫染色のプロトコールをいただきました。 unmasking solutionのステップは記載されているのですが、 1次抗体の前にblockingとペルオキシダーゼの不活性化がありません。 重要に見えるステップをスキップすることもしばしばあることなのでしょうか。 教科書には書かれていないのですが、 抗体の特異性が高いため、どちらのステップも省略していると自分では解釈していますが。

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