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HistoVT Oneを用いた抗原賦活化における気泡の発生に関して 削除/引用 No.7546-1 - 2019/01/08 (火) 21:05:25 - 初心者 いつも参考にさせていただいております。 マウス脳の凍結切片を免疫染色する際、市販のHistoVT Oneで抗原賦活化 (温浴で70℃, 20分) すると、サンプル上に気泡が発生し、その後残り続けてしまいます。キムワイプ等でつついても割れる気配はありませんでした。 なお、クエン酸バッファーを用いて同様の手順で抗原賦活化しても、このような気泡は認められません。 汎用される抗原賦活化剤であるため、私の切片作製の手順に問題があると思っていますが、どこに問題点があるのかわかりません。 どうかご助言をお願いいたします。 以下にプロトコルを記します。 1. マウスをPBSで還流後、脳を摘出 2. 4％PFAで2日間浸漬固定 (4℃) 3. 20％スクロースに置換して2日間置換 (4℃) 4. OCTコンパウンドで包埋し、クライオスタットを用いて20 μmで切断 (-15℃) 5. スライドグラスに載せた後、陰圧をかけたデシケーター内で脱気 (室温, 6時間) 6. HistoVT Oneで抗原賦活化 ←ここで気泡発生

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