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(無題) 削除/引用 No.7497-4 - 2018/12/19 (水) 12:36:10 - 1 HEPES bufferは光にながく曝していると微量のH2O2が生じるという論文はみたことがありますが、Trisは知りません。免疫沈降が上手く行かない原因が buffer中のH2O2では、と思い至った経緯はどういったことでしょうか。生化学領域では免疫沈降を含めTri-HClは汎用されていますが、H2O2が実験上問題になったということは聞いた事無いです。 bufferに2価金属イオンを添加しているのでなければ、低濃度のH2O2それ自体が抗体や抗原を抗原抗体反応ができなくなるほど傷害することはかんがえにくいです。なので仮に低濃度のH2O2が生じていたとしても、免疫沈降がうまくいかない原因は他にあるようなきがします。 H2O2について心配ならば試薬のメーカーを変えるとか、より高純度のものを用いるとかで対処できるようにおもいます。

(無題) 削除/引用 No.7497-3 - 2018/12/19 (水) 11:59:45 - toto TrisとHClを混ぜるだけでサブμMのH2O2ができるというのは、ちょっと不思議な気がしますが、検出されているものはほんとにH2O2なのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.7497-2 - 2018/12/19 (水) 09:55:49 - おお 実際に効果的かという点で文献などは調べたことはないのですが、メルカプトエタノール、DTTや還元型グルタチオンとか使えそうな気がします。

バッファー内で発生する過酸化水素について 削除/引用 No.7497-1 - 2018/12/19 (水) 08:55:45 - ゆき Tris-HClバッファーを使って免疫沈降実験をしようと考えています。 いくつかプレ実験を行なったのですが、バッファー内に含まれる過酸化水素量を定量したところ数百nM程の過酸化水素が含まれており、これが見たい現象を妨げている可能性が示唆されました。 そこで質問なのですが、バッファー内の過酸化水素を消す方法をお聞きしたいです。分解酵素であるカタラーゼは出来れば使いたくありません。。。マンガンといった金属もあまり添加したくないのです。。Darkに置いとけば分解されますかね？その場合はどのくらいの期間置いとけば良いのでしょうか？ 素人なのでご教授して頂けると幸いです。

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