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(無題) 削除/引用 No.7485-3 - 2018/12/15 (土) 23:37:21 - コンピテント大腸菌 おお先生 7万とあります。 だいたいそのindependent clonesの100倍あればいいと思うので、 7 x 10^6のコロニーが出てくれればいいような気もするのですが、addgeneからの指示書には、1万のRNAiクローンに対して1つエレポしなさいとかかれてありますので、合計で7回エレポして、そのすべての大腸菌をcombineして、まくようですが、必要なコロニー数 (7x10^6)を圧倒的に超える計算になるのですよね... 私の計算が間違いなのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.7485-2 - 2018/12/15 (土) 03:43:22 - おお インディペンデントクローン数（ライブラリーのサイズ）はどれくらいですか？

大腸菌のプレート上の濃度について。 削除/引用 No.7485-1 - 2018/12/15 (土) 02:27:23 - コンピテント大腸菌 いつも拝見させてもらっています。 この度RNAi libraryを購入しました。 これを1x10^10 cfu / ugオーダーの大腸菌にエレクトロポレーションで形質転換後、10mmの大腸菌ペトリディッシュにプレートする予定です。 指示書に従い、1ディッシュあたり、50000コロニーになるように大腸菌を捲くようにとあります。（addgene社） もちろんそれは隣り合う大腸菌が接触しないように、ライブラリにバイアスがかからないように、という意図だと思うのですが、ディッシュに撒くコロニー数を”50000コロニーになるように”する際はどのようにすればいいでしょうか？ 導入DNA量は指示書に従い、1コンピテントセルあたり、50ng使用します。 Competencyが1x10^10 cfu / ugならば、0.05x10^10 cfu / 50 ngということになるかと思います。 つまり5x10^8のコロニーが出現する計算となり、50000コロニー/ディッシュで撒くとなると、10000ペトリディッシュに撒くということになってしまうのですが、このような計算ではないのでしょうか？ 100枚ほどに撒くことを予想していたので、困惑しています。 ご意見いただけますと幸いです。よろしくお願いいたします。

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