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pETの共発現
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No.7476-TOPIC - 2018/12/12 (水) 18:22:39 - あおいろ
とある論文 (Nature, 522, 497-501, (2015)) において、『pET21bに遺伝子A、pET30に遺伝子Bを導入したベクターをそれぞれ作製し、E.coli BL21に導入し、共発現』させていました。
pET21bとpET30はそれぞれアンピシリン、カナマイシン耐性遺伝子を持っていますが、複製起点は同じだったはずです。
複製起点が同じプラスミドで共発現はできないものだと認識していたのですが、異なる選択マーカーを持っていれば共発現できるものなのでしょうか?
勉強不足で恥ずかしいですが、お答えいただけると幸いです。
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No.7476-5 - 2018/12/13 (木) 18:22:56 - あおいろ
monさん、中年さん、なるほど!
なぜ同じ複製起点を持ったプラスミドを複数入れられないと言われているかも含めて理解できました!
ありがとうございました!
(無題)
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No.7476-4 - 2018/12/13 (木) 09:48:34 - 中年
直観的な説明が下に挙げた文献のp.611にあります。
https://www.sbj.or.jp/wp-content/uploads/file/sbj/8910/8910_yomoyama-2.pdf
(無題)
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No.7476-3 - 2018/12/13 (木) 09:41:43 - 中年
不和合性というのはそういうものではなくて、プラスミドが2つの娘細胞に分配される際のコピー数のゆらぎに起因する確率的な現象なのだそうです。つまり、2種類の抗生物質で選択を掛け続ける限り、2つのプラスミドを共存させることに何の問題もないことになります。ことことは私もこのフォーラムで教わりました。下に挙げたのはその時のトピックです。
http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?start=21;mode=view;Code=3040
(無題)
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No.7476-2 - 2018/12/12 (水) 20:50:37 - mon
お勧めしませんが、アンピシリン、カナマイシン両方入れて選択しておけば可能です。
pETの共発現
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No.7476-1 - 2018/12/12 (水) 18:22:39 - あおいろ
とある論文 (Nature, 522, 497-501, (2015)) において、『pET21bに遺伝子A、pET30に遺伝子Bを導入したベクターをそれぞれ作製し、E.coli BL21に導入し、共発現』させていました。
pET21bとpET30はそれぞれアンピシリン、カナマイシン耐性遺伝子を持っていますが、複製起点は同じだったはずです。
複製起点が同じプラスミドで共発現はできないものだと認識していたのですが、異なる選択マーカーを持っていれば共発現できるものなのでしょうか?
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