Bio Technical フォーラム

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qPCR 融解曲線 電気泳動 トピック削除
No.7428-TOPIC - 2018/11/23 (金) 12:20:16 - わんこ
qPCRをサイバーグリーン法で行おうと思っています
質問1 初めて使うプライマーなので電気泳動にてバンドを確認しようと思います。この時qPCRでできた産物で電気泳動を行いたいのですが、融解曲線をかけた産物でも電気泳動に問題はないのでしょうか?

質問2 融解曲線から得られたTm値と、プライマーから算出される産物のTm値とが10℃くらい差があるのですが、これは普通なのでしょうか
 
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(無題) 削除/引用
No.7428-4 - 2018/11/24 (土) 02:44:39 - おお
>バンドが2つ現れても、それは変性DNAの分

よく分からんけどそれで評価になってるんだろうか。。。

同じ条件でRUNして融解曲線をかかずに電気泳動してみては?

(無題) 解決済み 削除/引用
No.7428-3 - 2018/11/23 (金) 15:59:07 - ワンコ
APさんありがとうござます
バンドが2つ現れても、それは変性DNAの分ということですね!
産物をそのまま泳動してみます

(無題) 削除/引用
No.7428-2 - 2018/11/23 (金) 12:42:30 - AP
融解曲線取得用のプログラムも複数種あると思いますが、

現在使用している、融解、再アニールサイクルを繰り返して最後にアニールして終わるシステムでは、その後泳動してもほぼ非変性と同じような泳動像が得られています。昔の機械は融解しっぱなしだったような記憶があるけど、

まあ、通常、融解・再アニールしたものを泳動すると、ちゃんと再アニールしたバンドと、変性DNAによるバンドの両方が見えますね。

qPCR 融解曲線 電気泳動 削除/引用
No.7428-1 - 2018/11/23 (金) 12:20:16 - わんこ
qPCRをサイバーグリーン法で行おうと思っています
質問1 初めて使うプライマーなので電気泳動にてバンドを確認しようと思います。この時qPCRでできた産物で電気泳動を行いたいのですが、融解曲線をかけた産物でも電気泳動に問題はないのでしょうか?

質問2 融解曲線から得られたTm値と、プライマーから算出される産物のTm値とが10℃くらい差があるのですが、これは普通なのでしょうか

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