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T7 RNAポリメラーゼの二本鎖領域 トピック削除
No.7424-TOPIC - 2018/11/22 (木) 01:07:25 - T7
以前このフォーラムで見た記憶があるんですが、T7転写を行う際、鋳型全長が二本鎖でなくとも、プロモーター領域さえ二本鎖であればOKなのがT7という話でよかったでしたでしょうか。それはSP6でしたっけ…？

検索してもいまいち情報にたどり着けません。

ご存知の方、ご教示いただけたら幸いに思います。
　
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(無題) 削除/引用
No.7424-5 - 2018/11/22 (木) 18:12:40 - おお
＞CUGA® in vitro Transcription Kit

このキットは変異を入れてますから同等の効率がT7 polで期待できるかどうかきになるところではありますが、、、

(無題) 削除/引用
No.7424-4 - 2018/11/22 (木) 14:56:44 - s
ニッポンジーン

CUGA® in vitro Transcription Kit 　ユーザーズマニュアル(PDF)
に詳しいですよ。

(無題) 削除/引用
No.7424-3 - 2018/11/22 (木) 07:07:04 - T7
おおさんご回答ありがとうございます。

自分でもその後もうちょいよく調べてみて、同じく98年のこの辺とか目に付いたんですが（https://academic.oup.com/nar/article/26/15/3550/2360082）、原則としてはプロモーター部が二本鎖であれば問題ないようですね。

今回その疑問を持ったのは、PCRを挟まずオリゴのアニールだけで何とかなるレベルの短い鋳型を転写しようとしてまして、結構な数のサンプルがあるので、ケチるべくForward鎖はT7部だけでいいのかな、と思ったためでした。

配列によっては…とのことですが、とりあえずやってみます。どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.7424-2 - 2018/11/22 (木) 04:38:58 - おお
１９９８年の論文ですが、T7プロモーター領域がダブルストランドであればTranscriptionが始まれば一本鎖でもT7 Polymeraseは走るというデーターはあるようですが、一本鎖ではT7 Polymeraseが安定化しないという話もあり、条件や配列によるのかもしれませんね。

http://www.jbc.org/content/273/17/10253.full#ref-29

The non-template (NT) strand of the DNA does not appear to be required for initiation or for the early stages of transcription, ... Milligan et al. (7) have shown that the enzyme can transcribe a single-stranded DNA template once it has initiated transcription from a double-stranded promoter.

However, Zhouet al. (16, 17) have suggested that the stability of the EC may require the presence of duplex DNA at the leading edge of the elongation complex, as an elongation complex that is halted just upstream from a region in which the NT strand is missing appears to be unable to resume transcription.

T7 RNAポリメラーゼの二本鎖領域 削除/引用
No.7424-1 - 2018/11/22 (木) 01:07:25 - T7
以前このフォーラムで見た記憶があるんですが、T7転写を行う際、鋳型全長が二本鎖でなくとも、プロモーター領域さえ二本鎖であればOKなのがT7という話でよかったでしたでしょうか。それはSP6でしたっけ…？

検索してもいまいち情報にたどり着けません。

ご存知の方、ご教示いただけたら幸いに思います。
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