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(無題) 削除/引用 No.7400-3 - 2018/11/13 (火) 16:28:28 - 抗体屋 一つだけ確認。 抗体をコートするプレートのブランドは変わっていませんか？ コートされやすさ、その結果刺激の強さは、使うプレートのブランドにより大きく異なることを経験しています。

(無題) 削除/引用 No.7400-2 - 2018/11/13 (火) 11:41:35 - おー 以前のうまくいっていたロットでは試しましたか？ 以前同じようなことがあったとき、うまくいっていたロットでもうまくいかず 結果的に機器に問題があったことがありました。

T細胞の抗体刺激が上手くいきません 削除/引用 No.7400-1 - 2018/11/13 (火) 11:03:55 - えむ T細胞の抗体刺激に対する増殖応答が綺麗に見えません... 前日にCD3抗体とCD28抗体の希釈系列を炭酸バッファーで96 wellプレートにcoatし、4度overnightでincubationしています。翌日、マウス脾臓やリンパ節T細胞をMACSソート、CTVラベルをしてPBS washしたプレートに撒き、day3前後で解析しています。 昔からやっている系で、以前は問題なくラベルの半減で増殖を検出でき、またサイトカイン産生も見えていたのですが、最近増殖が上手く見えません(分裂してる様子が見えず、細胞数も少ないです)。サイトカインの方は以前と同レベルで検出できるのですが...(IL2に関しては増殖に使われないのでむしろ多く出ます)。増殖しすぎて死んでいるわけでもなさそうです。 そんなに難しい系でもないですし、プロトコルも変わっていないので原因がわかりません。 FCSのロットが変わったせいだとか、他のassayも同時進行するようになったから時間がかかりすぎているのか、、など悩んでいます。 同じようなトラブルを経験した方、またその対処法などご存知の方がおられましたら教えていただきたいです。 宜しくお願いいたします。

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