Bio Technical フォーラム

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cell counting kit8 トピック削除
No.7391-TOPIC - 2018/11/07 (水) 16:31:26 - mtpjtm
細胞の増殖率を評価する際にcell counting kit8 を使って見ようと考えています。
質問が2つあります。

細胞数を定量化するために検量線を引く方法があると思いますが、これがうまくいきません。検量線はうまく引けるのですが、それと実験用のものと照らし合わせると数が明らかにおかしいです。おそらく細胞数が少ないために少しの吸光度のばらつきで大きく細胞数が変わってしまうからだと感じているのですが、これを改善する方法はないでしょうか。

また、試薬は培地の1/10の量で行うと思いますが、これは計測の際の培地の量を減らすことで試薬の量を減らしても良いのでしょうか。制度に差は出ないのでしょうか。私が行った限り、検量線等は問題なく引けたのですが、同様の検証を行った方がいましたら結果を教えていただきたいです。

初歩的な質問で申し訳有りません。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7391-6 - 2018/11/09 (金) 11:03:13 - おお
>[Re:5] PDさんは書きました :
> 細胞密度によって増殖率も多少変わるし、播種の濃度はあてにならないのでは?

私もそう思います。でもダブリングタイムを考えれば多くても2倍以内に収まってるだろうなぁと思いますけど。12時間だとよりマシでしょうね、

(無題) 削除/引用
No.7391-5 - 2018/11/09 (金) 10:52:57 - PD
細胞密度によって増殖率も多少変わるし、播種の濃度はあてにならないのでは?

(無題) 削除/引用
No.7391-4 - 2018/11/08 (木) 09:51:22 - mtpjtm
回答ありがとうございます。

検量線は実験用と同じ懸濁液から細胞数を調整して(6種類ほど)播種し、12hか24h培養した後吸光度を測定して作製しています。R2値はだいたいいつも0.998程度にはなりますので問題はないのかなと考えています。

(無題) 削除/引用
No.7391-3 - 2018/11/07 (水) 18:25:30 - おお
改善というか、いっそのこと数を数えてしまったほうがはやいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.7391-2 - 2018/11/07 (水) 18:23:39 - おお
細胞内の酵素を測るわけだから死んだ細胞にその酵素がないと思わないほうがいいのと、細胞の生理的な状態でその酵素活性も変わるので、絶対的に細胞数を反映してない可能性も考えるべきでしょう。

>試薬は培地の1/10の量で行うと思いますが、これは計測の際の培地の量を減らすことで試薬の量を減らしても良いのでしょうか。

培地の量というよりは細胞の数(酵素活性)が試薬の量に対してある程度以上になれば(過剰になれば)反応が頭打ちします。検量線がまっすぐな範囲なら使えるでしょうけど。

ところで検量線ってどうやって引いてるの?

cell counting kit8 削除/引用
No.7391-1 - 2018/11/07 (水) 16:31:26 - mtpjtm
細胞の増殖率を評価する際にcell counting kit8 を使って見ようと考えています。
質問が2つあります。

細胞数を定量化するために検量線を引く方法があると思いますが、これがうまくいきません。検量線はうまく引けるのですが、それと実験用のものと照らし合わせると数が明らかにおかしいです。おそらく細胞数が少ないために少しの吸光度のばらつきで大きく細胞数が変わってしまうからだと感じているのですが、これを改善する方法はないでしょうか。

また、試薬は培地の1/10の量で行うと思いますが、これは計測の際の培地の量を減らすことで試薬の量を減らしても良いのでしょうか。制度に差は出ないのでしょうか。私が行った限り、検量線等は問題なく引けたのですが、同様の検証を行った方がいましたら結果を教えていただきたいです。

初歩的な質問で申し訳有りません。
よろしくお願いします。

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