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(無題) 削除/引用 No.7387-10 - 2018/11/07 (水) 10:16:35 - おお single cell cloningをしたばあいなにか特別なものを拾ってしまっていて、それが一般論などを反映しないこともあります。なので複数とって調べるよう指摘がある場合もあります。 指摘があるように高濃度薬剤でしばらく維持すればより耐性のものが取れる（死滅しなかったら）だろうから、そのほうが手っ取り早いと思います。

(無題) 削除/引用 No.7387-9 - 2018/11/07 (水) 10:03:26 - asan 薬剤Aの耐性が指標ならば、わざわざ単一クローン化してもしなくても普通により強い濃度で薬剤Aをかけて耐性のクローンを回収してくる以外の方法はないと思います。 通常シングルクローン化する場合はヘテロな集団を一定の指標で均一なものにしたい理由があるとか、バルクの状態では目的外の理由による偽陽性が混じる可能性を完全に排除したいからであって、逆に言えばクローン化によるデメリットもないとは言えません。 耐性株作製後の選択圧をかけ続けるかどうかは例えばその耐性が増殖や生存に不利なものであれば選択圧がなくなったら徐々に耐性の弱いものが優位に増えてきてしまいにはなくなる可能性はありますが、通常の遺伝子の安定発現株等の作製の場合は一度完全にシングル化したら抗生剤を抜くとか濃度を下げるとかすることはありますよ。実験にできるだけ余計なものを入れたくないとか、抗生剤のコスト削減だとか色々な理由があ流でしょうが、少なくとも抜く前にストックをたくさん取っておいて問題が起きたら元に戻れるぐらいのバックアップはとるかもしれませんが。

(無題) 削除/引用 No.7387-8 - 2018/11/07 (水) 09:36:28 - おお >遺伝子変異による耐性獲得であった場合に、cloningによってstableな耐性株を得られる可能性があるというように理解しました。 遺伝子に変異があるのをどうやって確かめるのかよく考えてみてください。 ベクターでなにかの発現ベクターをトランスフェクションしてマーカーの薬剤選択でStableを作っても（Single colonyをひろっても）、薬剤抜きで継代すると目的のものが徐々に発現しなくなることもあります。薬剤いれていても同様のことが起こりえます。細胞はそう安定なものではないと思っておいたほうがいいとおもいます。 ただもちろん選択圧がなくても維持できる形質も多くあるのも事実です。

(無題) 削除/引用 No.7387-7 - 2018/11/07 (水) 09:21:42 - 院生 mon様 遺伝子変異による耐性獲得であった場合に、cloningによってstableな耐性株を得られる可能性があるというように理解しました。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.7387-6 - 2018/11/07 (水) 08:29:57 - mon 耐性株になった原因には、代謝活性の変化、エピジェネティックな変化、遺伝子変異（遺伝子数の変化、変異、染色体レベルの変化）等があります。前二者は一時的なものが多く、薬剤を除くと元の性質にも戻ることが多いです。 上記を考えるとsingle cell cloningの意義も分かりますよね。

(無題) 削除/引用 No.7387-5 - 2018/11/07 (水) 07:35:53 - 院生 一部見逃してました。 耐性株をsingle cell cloningする利点はあまりないということでよろしいでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.7387-4 - 2018/11/07 (水) 07:28:40 - 院生 おお様 私がsingle cell cloningする意義を理解していないことがわかりました。 いくつかのcloneから最も耐性が強いcloneを選択するためにsingle cell cloningしようと考えています。（とボスから言われています） 耐性株をsingle cell cloningする意義は耐性の強いcloneが得られる可能性がある、以外にどのような利点があるのか教えて頂けないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.7387-3 - 2018/11/07 (水) 06:23:18 - おお >薬剤Aの耐性株を作りました。 >stableなcell lineにするため 薬剤耐性という観点からはsingle cell cloningはあまり意味がないと思います。single cell cloningするとStableになるというのもよく理解ができません、

(無題) 削除/引用 No.7387-2 - 2018/11/07 (水) 05:19:12 - おお No

耐性株のcloning 削除/引用 No.7387-1 - 2018/11/07 (水) 04:49:24 - 院生 培地に薬剤Aを添加して約半年間継代し薬剤Aの耐性株を作りました。 stableなcell lineにするためにsingle cell cloningを行う予定です。 cloningした耐性株が薬剤Aに対して耐性であると確認できた場合、この株は薬剤Aを添加せずに長期的に培養しても耐性は失わないと考えてもいいのでしょうか？

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