Bio Technical フォーラム

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リアルタイムPCR サイクリングプローブについて トピック削除
No.7381-TOPIC - 2018/11/05 (月) 17:34:13 - Blank研究生
卒業してから改めて研究を始めることになりました新米研究生です。

以下のようにHEX,FAM標識のプローブを設計したのですが、
1ウェルに2種類のプライマーを同時に使用することは可能なのでしょうか。

・5’Eclipse-CGTTGG(T)AATTC-HEX3’ (Length : 12) ( ):RNA
・5’Eclipse-GTTGG(C)AATTCA-FAM3’ (Length : 12) ( ):RNA

また、2種類のプローブが同時に使用できる場合、
以下のプロトコルですとプローブが0.8μl必要なので
2種類のプローブを半量ずつ、0.4 μlずつで可能なのでしょうか。

以下はタカラバイオのプロトコルです。

< 1 反応あたり > 
CycleavePCR Reaction Mix(2×conc.) 10 μl
PCR Forward Primer(10 μM)     0.4 μl
PCR Reverse Primer(10 μM)     0.4 μl
サイクリングプローブ(5 μM)     0.8 μl
ROX Reference Dye(50×conc.) 0.4 μl
template(<100 ng) 1.0 μl
滅菌精製水 7.0 μl
(Total 20μl)

基本的な質問で申し訳ないのですが、
ご存知の方いらっしゃれば、ご教授頂ければ幸いです。

よろしくお願い致します。
 
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リアルタイムPCR サイクリングプローブについて 削除/引用
No.7381-3 - 2018/11/09 (金) 14:13:05 - Blank研究生
論文の情報ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.7381-2 - 2018/11/06 (火) 15:40:00 - おお
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3816589/

リアルタイムPCR サイクリングプローブについて 削除/引用
No.7381-1 - 2018/11/05 (月) 17:34:13 - Blank研究生
卒業してから改めて研究を始めることになりました新米研究生です。

以下のようにHEX,FAM標識のプローブを設計したのですが、
1ウェルに2種類のプライマーを同時に使用することは可能なのでしょうか。

・5’Eclipse-CGTTGG(T)AATTC-HEX3’ (Length : 12) ( ):RNA
・5’Eclipse-GTTGG(C)AATTCA-FAM3’ (Length : 12) ( ):RNA

また、2種類のプローブが同時に使用できる場合、
以下のプロトコルですとプローブが0.8μl必要なので
2種類のプローブを半量ずつ、0.4 μlずつで可能なのでしょうか。

以下はタカラバイオのプロトコルです。

< 1 反応あたり > 
CycleavePCR Reaction Mix(2×conc.) 10 μl
PCR Forward Primer(10 μM)     0.4 μl
PCR Reverse Primer(10 μM)     0.4 μl
サイクリングプローブ(5 μM)     0.8 μl
ROX Reference Dye(50×conc.) 0.4 μl
template(<100 ng) 1.0 μl
滅菌精製水 7.0 μl
(Total 20μl)

基本的な質問で申し訳ないのですが、
ご存知の方いらっしゃれば、ご教授頂ければ幸いです。

よろしくお願い致します。

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