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viability
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No.7375-TOPIC - 2018/11/05 (月) 13:12:50 - viability
培養細胞の培養上清から生存活性を測定できる試薬をさがしています。
LDHやMTTでは細胞サンプルを使用しますが、培養上清をサンプルとして生存活性や増殖を測定する方法はないでしょうか。
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No.7375-10 - 2018/11/05 (月) 19:26:05 -
sohiko
monさんが記載しているように、アラマーブルーが該当すると思います。
結構使えるイメージがありますが、あまり知られていないですよね。
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/DAL1025
(無題)
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No.7375-9 - 2018/11/05 (月) 17:47:03 - おお
細胞を培養していると培地にLactateがたまってくるのでそういうのはつかえないかしら。
http://www.jimmunol.org/content/jimmunol/early/2017/12/29/jimmunol.1700886.full.pdf
https://www.abcam.com/l-lactate-assay-kit-colorimetric-ab65331.html
(無題)
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No.7375-8 - 2018/11/05 (月) 17:40:20 - mon
あるいは、分泌性の安定な酵素遺伝子(ALP、ルシフェラーゼ等)を導入しておいて、酵素活性を指標にするとか?
(無題)
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No.7375-7 - 2018/11/05 (月) 17:35:30 - mon
細胞を殺さずにアッセイしたい、と解釈でよいのかな?
APさんが紹介したWST-8や、AlamarBlue試薬が該当するかな。
注意事項は APさんが紹介したリンクをみてもらうとして、
どちらもphenol red free培地の方がデータのバラツキが少ないです。
(無題)
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No.7375-6 - 2018/11/05 (月) 14:07:13 - viability
ご回答ありがとうございます。
諸事情により培養細胞の評価が行えないため、培養上清から細胞増殖を評価できればと考えていました。なかなか難しそうですね。
(無題)
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No.7375-5 - 2018/11/05 (月) 13:58:16 - AP
http://dominoweb.dojindo.co.jp/seihindata.nsf/list/mtt-wst-ldh-cell-cytotoxicity-viability-proliferation?OpenDocument
培養上清でLDHアッセイするのは、このページにリンクのあるプロトコール集の言うところの
「ノンホモジニアスアッセイ」ですね。
(無題)
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No.7375-4 - 2018/11/05 (月) 13:56:59 -
TS
細胞増殖をLDHで見るというのは、あまり一般的ではないですね。
細胞増殖をよく反映する上清中の一般的な因子というのはちょっとわかりませんね。
細胞数がメインのデータであれば、いずれにしても複数の方法での観察が必要と思います(MTT、実測の細胞数、LDHなど)。
(無題)
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No.7375-3 - 2018/11/05 (月) 13:49:33 - viability
TS様
ご回答ありがとうございます。
LDHは細胞死にともなって排出される因子を指標とするため増殖能の定量という発想に至りませんでした。評価の仕方が間接的にも思えるのですが、培養上清を用いた細胞増殖の評価という点でLDHは一般的だったでしょうか?
スタートの細胞数が同じであれば、細胞増殖と細胞死は表裏一体にあると思うのですが、細胞死側からアプローチする方法しかないものでしょうか?
(無題)
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No.7375-2 - 2018/11/05 (月) 13:19:12 -
TS
LDHは上清ですよ。
viability
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No.7375-1 - 2018/11/05 (月) 13:12:50 - viability
培養細胞の培養上清から生存活性を測定できる試薬をさがしています。
LDHやMTTでは細胞サンプルを使用しますが、培養上清をサンプルとして生存活性や増殖を測定する方法はないでしょうか。
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