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解決した 削除/引用 No.7367-4 - 2018/11/01 (木) 18:23:04 - おいた 解決

(無題) 削除/引用 No.7367-3 - 2018/11/01 (木) 18:03:42 - おお >次に100000gでエクソソームを単離し、沈殿をPBSでwashの為再度100000gで遠心すると書きました。最後に、1.5mlチューブに回収すると思うのですが、回収はwashしたPBSを出来るだけ捨てて 沈殿(エクソソーム)の部分を1.5mlチューブに入れるのでしょうか？ なにが目的で沈殿をPBSでwashの為再度100000gで遠心するのでしょうか？出発材料は培養した培地とかだとして、培地にある成分を除くためですよね。だから最初の100000gで遠心後できるだけ上澄をとって、PBSを加えるんですよね。 ２回目の100000gで培地の成分はかなり希釈されて上澄を出来るだけ取ることで、培地からの成分が無視できるなら、けんだくするか分析で使うLysis　Bufferなどに溶解して1.5mlチューブに回収したらいいです。 ２回目の100000gで培地の成分は上澄をとっても培地からの成分が無視できないほどあると思うなら、もう一度（３回目）同じチューブでけんだくし100000gで回収したらいいです。

卓上超遠心 削除/引用 No.7367-2 - 2018/11/01 (木) 16:57:08 - ema 容量があればそのままフロア型超遠心機で、 https://ls.beckmancoulter.co.jp/products/centrifuges/optima-max 1.5mlにしたければ卓上超遠心で回してください。

膜分画 とエクソソーム 単離の超遠心 削除/引用 No.7367-1 - 2018/11/01 (木) 16:33:02 - おいた 来週から卒業研究の予備実験が始まるのですが、超遠心を使って細胞の膜分画とエクソソームの単離を行うことになりました。 膜分画に関しては先輩が教えてくださったのですが、エクソソームの単離は自分で調べてプロトコルを書いてみてといわれ、調べたのですが最後の回収方法がわかりません。 まず、300g 2000gで死細胞などを取り除き、10000gでマイクロパーティクルを回収、 次に100000gでエクソソームを単離し、沈殿をPBSでwashの為再度100000gで遠心すると書きました。最後に、1.5mlチューブに回収すると思うのですが、回収はwashしたPBSを出来るだけ捨てて 沈殿(エクソソーム)の部分を1.5mlチューブに入れるのでしょうか？それとも、沈殿を回収する際にどうしてもPBSが入ってしまうと思うので回収したのちにまた小型の遠心機にかけて上清のPBSを捨てて新たにPBSに懸濁して保存でしょうか？ 100000gで回収される様なものが小型の遠心機にかけて見えるのか心配です。

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