Bio Technical フォーラム

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In cell westernの再親水化 トピック削除
No.7328-TOPIC - 2018/10/18 (木) 07:03:11 - ar
In cell westernで、測定終了後に一次抗体が間違っていることに気づいてしまいました・・。既にwellが乾いてしまっているのですが、ここからリカバリーする方法はありますでしょうか。PVDF膜みたいにメタノールで再親水化などできますかね?

来週再試験は行いますが、他の方にフィードバックする都合上、参考データ程度でいいので今週結果を出せれば出したいと思っています。

ちなみに間違えた一次抗体は本来のものとホストが違い、実際シグナルもほとんど出なかったのでストリッピングは不要と考えています。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.7328-3 - 2018/10/18 (木) 15:18:26 - ar
mozさん

ご回答いただきありがとうございます。
ひとまずPBS-Tで再親水化を行い、正しい一次抗体でやり直してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.7328-2 - 2018/10/18 (木) 13:32:13 - moz
ホルマリン固定しているなら、PBS-Tween20やPBS-TritonX100等で親水化できると思いますが、(かつ、細胞が剥がれないなら)抗原タンパクの変性具合(抗体の結合性が復活するか否か)は運次第かな。。
メタノール固定(脱水+@)できる抗原なら可能性は高いと思います。

In cell westernの再親水化 削除/引用
No.7328-1 - 2018/10/18 (木) 07:03:11 - ar
In cell westernで、測定終了後に一次抗体が間違っていることに気づいてしまいました・・。既にwellが乾いてしまっているのですが、ここからリカバリーする方法はありますでしょうか。PVDF膜みたいにメタノールで再親水化などできますかね?

来週再試験は行いますが、他の方にフィードバックする都合上、参考データ程度でいいので今週結果を出せれば出したいと思っています。

ちなみに間違えた一次抗体は本来のものとホストが違い、実際シグナルもほとんど出なかったのでストリッピングは不要と考えています。

よろしくお願いいたします。

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