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(無題) 削除/引用 No.7291-4 - 2018/10/12 (金) 00:36:59 - ＠ アルブミンはモノメリックな蛋白質ですが還元時と非還元時でSDS-PAGEでの易動度が異なります。還元時は67KDa付近ですが、非還元のときの方は易動度が遅くなり、みかけの分子量はもっと大きい値を示します（実際にその分だけ高分子量化した訳ではなくて単にゲルの中を動きにくくなったということです）。分子内ジスルフィドあるいはいろんなものと反応するために使うシステイン残基のフリーのSH基の状態が移動度に影響するらしいです。生理的に重要なシステイン残基を有するものや、システイン残基の多い蛋白質はそういうことが起こりやすいかもしれません。なので探せばそういう蛋白質はわりと結構あるとおもいます。 SDS-PAGEの示す易動度はかなり正確に分子量を反映すると思って概ね正しいですが、必ずしも絶対ではなく、蛋白質よっては実際の分子量を反映しない結果を示す例外もあります。

(無題) 削除/引用 No.7291-3 - 2018/10/10 (水) 21:03:08 - asan SDS-PAGEはその原理上立体構造を保つと当然分子ふるいとしてのアクリルゲルとの相互作用に影響が出る可能性があるため、移動度の違いが分子量に反映されなくなることはあります。 翻訳後修飾なども同様ですね。

(無題) 削除/引用 No.7291-2 - 2018/10/06 (土) 09:46:37 - おお >分子内ジスルフィド結合が泳動に影響を与えているのでしょうか？ もし分子内にS-Sがあるならその可能性はかなり高いです。断言はできませんけど。 >還元にすると、30kDにのみバンドが出ます。 >170はひょっとするとコンタミしているインタクトなマウスIgGかもしれませんね。 それなら還元状態で２５と５０あたりにバンドが出てもおかしくないと思いますが、、、

2量体を形成しないタンパク質を還元、非還元で流すと 削除/引用 No.7291-1 - 2018/10/06 (土) 03:34:10 - 2M 質問宜しくお願いします。 2量体を形成しないタンパク質を還元、非還元で流すと泳動パターンが異なりました。 非還元状態だと論文で言われているように35kD付近に出ますが、それ以外にも23、45、170以上にも出ています。特に170以上のバンドが強いです。サンプルはマウス血小板。一次抗体はラット。二次抗体はHRP抗ラット抗体です。 還元にすると、30kDにのみバンドが出ます。 170はひょっとするとコンタミしているインタクトなマウスIgGかもしれませんね。 さて、質問させてもらいたいのですが、 非還元ではモノは35で、還元下では30に分子量が下がります。 このいずれもがみたいタンパク質だとした場合、（分子間ではなく）分子内ジスルフィド結合が泳動に影響を与えているのでしょうか？そのタンパク質のノックアウトマウスがないのでこのバンドが本物かどうかはわかりません...

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