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(無題) 削除/引用 No.7283-7 - 2018/10/03 (水) 14:09:56 - AP >なんらかの方法でimmobilizationしないととれてしまうのですね。 念の為、付け加えますが、 ナイロンメンブレンの場合、UV照射でクロスリンクさせる方法がメジャーです。しかし、NCメンブレンでは禁忌です。発火する恐れがあり危険です。

(無題) 削除/引用 No.7283-6 - 2018/10/03 (水) 12:57:34 - mon 目的にもよりますが、直鎖状DNA末端にアミノ基をつけておいて(例えば片側のPCRプライマー５'端につけておく）、支持体(カルボキシル基）にアミンカップリング試薬で共有結合させる方法は、DNAマイクロアレイなどでも使用されています。

(無題) 削除/引用 No.7283-5 - 2018/10/03 (水) 10:19:52 - 教えて下さい 重要なこと教えてくださり皆様ありがとうございました。 なんらかの方法でimmobilizationしないととれてしまうのですね。 わかりました。がんばります。

(無題) 削除/引用 No.7283-4 - 2018/10/03 (水) 03:27:24 - おお 一本鎖にしないとつきにくいってうのがなかったかな。ポジティブチャージをもったナイロンの膜だとそういう心配もないし。

(無題) 削除/引用 No.7283-3 - 2018/10/03 (水) 00:00:07 - AP 今ではカタログでもあまりお目にかからないが、それ用のバキュームライン付きのオーブンというのがあるんです。

(無題) 削除/引用 No.7283-2 - 2018/10/02 (火) 23:54:12 - AP 温故知新。サザンブロットの方法を復習してみては。 NC膜でDNAをブロットする時は、高塩濃度下でキャピラリーブロットが普通で、エレクトロブロットもないわけじゃないが移動力の高さ塩濃度の低さから捕捉力が低くて、ほとんどすっぽ抜けるだろう。ブロットした後は、immobilizeしないとはがれるので、減圧下で(そうしないとNCが酸化して劣化し、最悪、発火する)、80度の乾熱オーブンで2時間ほど焼き付ける必要がある。

抗体でDNAが検出ができません。 削除/引用 No.7283-1 - 2018/10/02 (火) 23:08:01 - 教えてください ちょっと興味があってニトロセルロース膜にDNAをブロットして抗体で検出しようとしましたが反応しませんでした。方法は通常のウェスタンブロッティングの時の手順で、bufferはTBS+0.05%Tweenです。ニトロセルロース膜にブロットしたDNAは洗浄操作などで容易にとれてしまうのでしょうか。

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