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CRISPR/Cas9と細胞の形態変化 トピック削除
No.7265-TOPIC - 2018/09/26 (水) 16:37:37 - sk
質問がございます。
あるcell lineに対してcrispr/cas9を用いてノックアウトを行いました。
偶然、明らかな形態変化のあるクローンがあったため、シーケンスしましたが配列に変化はありませんでした。
(ちなみに、その他の多くのノックアウトできていない細胞には形態変化はございません。)

これはオフターゲットによるものと考えてよいでしょうか。

ご経験などございましたら、ぜひ教えてください。
よろしくお願いいたします。
 
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御礼 削除/引用
No.7265-4 - 2018/09/26 (水) 18:18:05 - sk
おお様、Tracker様

早急なご回答ありがとうございました。
cell lineはやはり意外とヘテロな集団なのですね。
大変参考になりました。

(無題) 削除/引用
No.7265-3 - 2018/09/26 (水) 18:11:14 - Tracker
細胞株は結構ヘテロな集団である印象です。
自分も気になって、遺伝子導入やゲノム編集等を全く行っていない細胞をシングルクローンにしてみると、やはり色んな形態のクローンに分かれます。
足をやたら伸ばして細長いとか、なんか大きいとか。
その上でもう一度親株を眺めてみると、確かに色んな形のやつが混ざっていることに気づいたりします、

(無題) 削除/引用
No.7265-2 - 2018/09/26 (水) 17:41:50 - おお
オフターゲットかもしれませんけどCell Lineとか一種類の細胞のように思えるけど意外とバリエーションがあるヘテロな集団だったりもしますので、その中から極端なバリエーションのものを拾った可能性もあります。

ただしStem cellとかバリエーションがそんなにあったら問題の細胞もあるでしょうし、正常細胞であればバリエーションの幅は少ないかもしれません。

CRISPR/Cas9と細胞の形態変化 削除/引用
No.7265-1 - 2018/09/26 (水) 16:37:37 - sk
質問がございます。
あるcell lineに対してcrispr/cas9を用いてノックアウトを行いました。
偶然、明らかな形態変化のあるクローンがあったため、シーケンスしましたが配列に変化はありませんでした。
(ちなみに、その他の多くのノックアウトできていない細胞には形態変化はございません。)

これはオフターゲットによるものと考えてよいでしょうか。

ご経験などございましたら、ぜひ教えてください。
よろしくお願いいたします。

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