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(無題) 削除/引用 No.7253-3 - 2018/09/22 (土) 22:24:09 - shii 私の場合、懸濁した菌液をスターラーなどで攪拌しながらフレンチプレスに導入してやっています。大腸菌ではなく、酵母ですが。

(無題) 削除/引用 No.7253-2 - 2018/09/22 (土) 18:55:39 - おお 大腸菌をけんだくしてゲノムのDNAが溶け出してきてどろどろしているのならけんだく液の組成などをちょっと考えたほうがいいかもしれません。それについては必要があればあとで書くとして、 たとえば２本のチューブに分けて遠心し、一方に２５ｍLのけんだく用バッファーをくわえてフレンチプレスにかけてしまう。かけ終わったえきで残りの大腸菌をけんだくして再度フレンチプレスにかけるとかどうかな。 それでもまだやりにくいというなら、 半分の大腸菌を一本のチューブ、残りは３本のチューブにわけて、最初のフレンチプレス後、のこり３本のうち一本をフレンチプレスした液を加えてけんだくしてさらにプレン地プレスと繰り返していけばどうかな。

大腸菌のフレンチプレスによる破砕 削除/引用 No.7253-1 - 2018/09/22 (土) 07:08:49 - 酵母太郎 タンパク質精製のために、大腸菌をフレンチプレスにより破砕しています。 水やバッファーを入れたときは、圧力がかかり問題なく水が出てくるのですが、大腸菌懸濁液をいれると、詰まってしまい圧力がかからなくなり、ライセートも出てこなくなってしまいます。 フレンチプレスで詰まらないようにするには、どのようにすればいいのでしょうか。 実験では、OD1.5、1Lの培地由来の大腸菌を25mLに懸濁して、破砕を試みています。懸濁の際はフレンチプレスが詰まらないように、なるべく丁寧に懸濁しています。懸濁バッファー25mLを増やすと、詰まりにくくはなるのですが、タンパク質精製のためボリュームはあまり増やしたくありません。コツを知っている方がいらっしゃいましたら、ご教授お願いします。

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