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ウエスタンのサンプル調整
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No.7196-TOPIC - 2018/09/03 (月) 15:30:39 - おか
学部の実習でウエスタンのサンプル調整をしたのですが、10マイクロ中に30マイクログラムのタンパクが載るように調整する方法を教わりました。
機械で測定したタンパク濃度が7μg/ulで、30マイクログラムに合わせたいので、30/7
約4ulとlysis及びサンプルバッファーで、最終量が30ulになるようにしました。
これは、30ul中に30ugのタンパクがいるのであって、10ul中には、30ugではなく10ugのタンパクしかいないと思うのですが、あってるのでしょうか。
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No.7196-5 - 2018/09/04 (火) 00:05:11 - おか
(無題)
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No.7196-4 - 2018/09/03 (月) 16:28:50 - AP
計算はそれでいいと思います。
プラクティカルには1レーンにどれだけのタンパク質をロードしたかが重要で、サンプル体積はウェルに収まる量ならなんぼでもいいのです。30 ug/10 uLにしようが、30 ug/30 uLにしようが1レーンに乗せきれば同じ10 ug/laneです。
泳動の方法によっては体積が大きくなるとバンドのシャープさが損なわれることもありますが、濃縮ゲルを乗っけたSDS-PAGEなら問題なし。
(無題)
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No.7196-3 - 2018/09/03 (月) 16:09:57 - おお
>30/7は4.29ul
もちろん分数のままで計算処理をしてもいいですよ
(無題)
削除/引用
No.7196-2 - 2018/09/03 (月) 16:06:24 - おお
ご自身で納得がいくように計算できるようになってほしいので結論は言いませんが、
ちょっと混乱しないように30/7は4.29ulとします。
でこういう場合違う方法で計算して同じ結果が出るかをみれば計算が正しいかどうかが確認できます。
4.29ulを30ulにするということですから、これは何倍希釈(a倍希釈としましょう)でしょうか。
7ug/ulをa倍希釈すると濃度はいくらになりますか?
これがあなたの計算方法と一致するするなら変なことをしてないと判断ができるはずです。
ウエスタンのサンプル調整
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No.7196-1 - 2018/09/03 (月) 15:30:39 - おか
学部の実習でウエスタンのサンプル調整をしたのですが、10マイクロ中に30マイクログラムのタンパクが載るように調整する方法を教わりました。
機械で測定したタンパク濃度が7μg/ulで、30マイクログラムに合わせたいので、30/7
約4ulとlysis及びサンプルバッファーで、最終量が30ulになるようにしました。
これは、30ul中に30ugのタンパクがいるのであって、10ul中には、30ugではなく10ugのタンパクしかいないと思うのですが、あってるのでしょうか。
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