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(無題) 削除/引用 No.7187-4 - 2018/09/02 (日) 04:10:08 - moz JKさん なるほど。大腸菌のクローニング用実験株では、相同組み換えを起こす遺伝子を潰してあるためか、10^7cfu/ug程度のコンピテントセル＋100ng DNAを使って薬剤耐性遺伝子を導入するポジティブ選択法でないとしんどいですね。

(無題) 削除/引用 No.7187-3 - 2018/09/01 (土) 16:20:50 - JK ちゃんとしたものがとれればいいので、効率は高いものを求めません。 相同組み換え効率の問題なのかもしれませんが、大腸菌ではどうなのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.7187-2 - 2018/09/01 (土) 12:27:58 - moz 大腸菌以外扱ったことはありませんが、遺伝子導入効率が低いためだと思います。 Electroporation法などでそこそこの導入効率が得られるようなら成功すると思いますが。

細菌の遺伝子破壊 削除/引用 No.7187-1 - 2018/09/01 (土) 10:03:16 - JK 細菌（Paracoccus）の遺伝子破壊を相同組み換えを利用しておこないたいと 考えています。相同部分を薬剤耐性遺伝子マーカーで挟んだ断片をそのまま 菌に導入すれば得られるのではないか、と思うのですが、過去の実施例を 調べていますと、導入断片をいったんベクターにつないで、大腸菌を使った 接合伝達でおこなっていました。断片をそのまま導入することになにか問題が あるのでしょうか。お詳しい方がいらっしゃればご教示いただければと思います。よろしくお願いします。

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